柑橘衰退病毒编码的主要蛋白对其致病力影响的研究

柑橘衰退病毒（Citrus Tristeza Virus，CTV）是对我国柑橘生产具有严重为害的重要病原物之一。目前，来源于病原物的抗性（pathogen-derived resistance，PDR）途径已成为CTV防治的研究热点。然而，由于CTV致病机理尚未十分清楚，该途径存在盲目地选择CTV核酸序列转化柑橘，而未能获得高效的抗性植株。本项目利用农杆菌介导的瞬时表达法与高通量RNAi反向遗传筛选相结合的功能基因组分析技术平台，建立墨西哥来檬的瞬时表达技术体系，将构建的dsRNA干涉植物表达载体快速转入墨西哥来檬植株中表达，使CTV编码的主要蛋白受到RNAi作用。从而，根据病毒致病性的表型特征分析柑橘衰退病毒编码的主要蛋白在其致病过程中的作用，阐明柑橘衰退病毒的致病机理及重要的致病因子，为有效地实现柑橘抗衰退病基因工程奠定基础。

柑橘衰退病毒（Citrus Tristeza Virus，CTV）是对我国柑橘生产具有严重为害的重要病原物之一。目前，来源于病原物的抗性途径已成为CTV防治的研究热点。然而，由于CTV致病机理尚未十分清楚，该途径存在盲目地选择CTV核酸序列转化柑橘，而未能获得高效的抗性植株。本项目利用农杆菌介导的瞬时表达法与高通量RNAi反向遗传筛选相结合的功能基因组分析技术平台，比较了柑橘衰退病毒编码的主要蛋白在其致病过程中的作用，发现大部分编码蛋白基因干扰后均能影响病毒对植物的侵染，但P6的影响不大。相比已报道的致病基因，功能尚未清楚的P18对病毒侵染力的影响更为显著，可能是柑橘衰退病毒重要的致病因子。该基因值得进一步研究，为有效地实现柑橘抗衰退病基因工程奠定基础。通过该项研究，为今后选择合适CTV核酸序列转化柑橘提供了重要的参考依据。. 此外，本项目实施还取得如下研究结果：（1）分析了已报道CTV基因组信息，获得CTV各主要编码蛋白的保守序列。由此构建的dsRNA表达文库在今后转基因抗性育种上应用，可避免CTV变异性，更有效控制病害发生。基因的同源性分析为建立稳定的CTV病毒分子检测体系提供了依据，目前已有效地在无病毒冰糖橙优系的筛选上得到应用，获得多个无病毒冰糖橙优系，为加快无病毒种苗的推广、促进冰糖橙产业的可持续发展均打下了良好基础。（2）通过分析注射缓冲液体系、表达载体和菌液浓度，建立了适合墨西哥徕檬的瞬时表达体系。该体系操作方便，无需组织培育过程而不受再生效率、转化效率低的限制，能使外源基因在柑橘体内快速、持续性表达。此外，该体系也在其他柑橘品种中经检测有效，这将为在柑橘中高通量分析基因功能提供了技术平台，有助从柑橘基因组信息中挖掘重要的农艺性状基因。（3）初步建立了植物抗CTV评价体系，确定了叶片注射利于植株注射dsRNA干涉植物表达载体后的抗性分析，以及筛选得到18SrRNA和UBQ10为通过基因表达差异分析植株抗性的最佳内参基因。这为今后研究CTV与植物的互作提供了有效的研究体系。. 通过该项目的实施，目前已发表论文1篇、会议报告2篇，申请专利1项，获得市级科技进步一等奖1项和市级论文三等奖1项。在研究生培养方面，毕业硕士生和在读博士生分别1人。