胶质母细胞瘤PTTG基因调控相关微小RNA的分离鉴定及其功能分析

miRNA is one of the important member of non-encoded RNA family, and it is testified that miRNA has been involved in multiple physiological and pathological process of life. The prophase work of the present study was provided by Jilin province natural scientific fund, and it was proved that high expression of PTTG gene was related with glioblastoma genesis, development and invasion. At the same time, it was testified that inhibiting PTTG gene expression could inhibit malignant biological behavior of glioblastoma and some specific miRNA expressed specially abnormal in glioblastoma. To make it clear how PTTG gene regulation in glioblastoma, we will screen and isolate miRNA which is related with PTTG gene in glioblastoma,presume effective molecule in regulating PTTG gene, analyze relative function of miRNA inhibiting malignant biological behavior of glioblastoma. The present study will furnish experimental basis for comprehensively understanding glioblastoma molecular basis and improve glioblastoma management in clinic.

miRNA是非编码RNA家族中的重要成员，已经证实其广泛参与生命体的多种生理与病理过程。本项目在前期吉林省自然科学基金的资助下已经证明，PTTG的高表达与胶质母细胞瘤的发生、发展及侵袭进程密切相关，抑制PTTG的表达能够抑制胶质母细胞瘤的恶性生物学行为，并且发现某些特异性miRNA在胶质母细胞瘤中的特异性表达异常。为了弄清胶质母细胞瘤中PTTG的基因调控机制，我们筛选分离胶质母细胞瘤中与PTTG相关的miRNA基因，推测调控PTTG中起作用的分子；分析miRNA指导抑制胶质母细胞瘤恶性细胞生物学行为的相关功能，为全面掌握胶质母细胞瘤相关的分子基础、提高临床上胶质母细胞瘤的综合治疗水平提供实验依据。

本研究筛选分离胶质母细胞瘤中与PTTG相关的miRNA基因，推测调控PTTG中起作用的分子，分析miRNA对胶质瘤恶性细胞生物学行为的抑制作用。研究共分3部分：.1、预测及验证调控PTTG基因的miRNA.PTTG的相关miRNA预测结果发现，miR-125b与PTTG mRNA的3’UTR端的序列相匹配。将含此位点的PTTG mRNA 3’UTR构建入luciferase报告系统。检测结果发现实验组荧光强度明显高于其阴性对照组；miR-125b mimic可显著增高U87细胞中PTTG蛋白水平（P<0.05）。.结果表明miR-125b可以通过与PTTG mRNA结合而调节其蛋白表达水平。.2、miR-125b在神经胶质瘤患者外周血和瘤体中的表达.高通量测序结果显示，与正常脑组织相比，胶质瘤中miR-125b明显上调。miR-125b在胶质瘤患者外周血清表达结果显示，胶质瘤患者外周血清中miR-125b水平明显高于正常人（P<0.01）。免疫组化及临床分析结果显示miR-125b与PTTG呈正相关，高miR-125b表达患者肿瘤无进展生存时间明显短于于低miR-125b表达肿瘤的患者。.这些结果表明miR-125b在胶质瘤患者体内表达上调，并与PTTG表达相关。. 3、miR-125b对胶质瘤细胞的恶性生物学行为的影响.结果显示，转染miR-125b的U87和U251细胞在48 h、72 h和96 h时增殖均高于对照组（P<0.05）。迁移及侵袭结果显示，转染miR-125b的U87细胞的迁移距离明显长于阴性对照组（P<0.05）。转染miR-125b的U87细胞穿过Matrigel胶的数量明显多于阴性对照组（P<0.01）。转染miR-125b的U87细胞的凋亡检测结果显示，转染miR-125b的U87细胞凋亡率明显低于阴性对照组（P<0.05）。.以上结果显示，miR-125b具有调节PTTG表达的作用，并可通过促进PTTG的表达促进胶质瘤细胞生长、侵袭和抗凋亡的作用。