基于单细胞PCR技术的抗丙型肝炎病毒E2蛋白广谱中和性全人单克隆抗体的制备及研究

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒引起的，在世界外围内广泛流行的病毒性肝炎。广谱的高中和活性的抗体免疫应答对于人体抵抗丙型肝炎感染具有重要的意义，但是目前对丙型肝炎广谱中和性全人单克隆抗体的研制尚开展不多，对丙型肝炎中和性抗体发挥作用的作用机制、关键的中和表位等也尚未完全了解。本课题拟运用单细胞PCR技术，从丙型肝炎感染者（包括自愈和持续感染者）外周血PBMC中分离获得抗丙型肝炎病毒E2蛋白的全人单克隆抗体，分析抗体的病毒中和活性和识别广谱性，对具有广谱中和活性的抗体进行识别表位研究。这一研究将有助于深入了解人体对于丙型肝炎病毒抗体应答的产生情况，有助于揭示丙型肝炎病毒侵染细胞的分子机制，还有助于丙型肝炎疫苗的设计和抗丙型肝炎治疗药物的研发。课题申请者已经成功建立单细胞PCR全人抗体研制技术体系，具备了必要的临床资源和实验手段，并已经开展了临床血清筛选等前期研究工作。

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒引起的，在世界外围内广泛流行的病毒性肝炎。广谱的高中和活性抗体免疫应答对于人体抵抗丙型肝炎病毒感染具有重要的意义。本课题运用单细胞PCR技术，从丙型肝炎感染者（包括自愈和持续感染者）外周血PBMC中分离获得抗丙型肝炎病毒E2蛋白的全人单克隆抗体，分析了抗体的病毒中和活性和识别广谱性，对具有广谱中和活性的抗体进行了识别表位研究。本课题达到了预定研究目标，完成了主要研究任务，课题进展比较顺利。对照研究目标，所完成的主要工作为：运用单细胞PCR的方法，从HCV感染者外周血E2特异性记忆B细胞中，成功分离制备了以8D6为代表的若干株针对HCV病毒E2蛋白的高中和活性并具有一定中和广谱性的全人源单克隆抗体。其中全人源抗体8D6对HCVcc（感染性颗粒） JFH-1株的中和IC50小于0.1μM。鉴定了所获得单克隆抗体在体外针对不同亚型HCVcc的中和活性，其中抗体8D6对1b和2a亚型的HCV病毒均有良好的病毒中和效果。另外，初步研究了抗体所识别的位于E2蛋白上的中和表位。在此基础上，对其可能发挥作用的分子机制进行了初步探讨。