大网膜包裹紫杉醇缓释膜对良性胆管瘢痕作用的实验研究

Bile duct scar stricture is complex and difficult problem in the biliary surgery; Biliary local drug and repeated to medicine difficult, the influence of the environment in the bile is restricted by the main factors of the prevention and control of bile duct scar. This research focuses on the basis of the series, the author put forward the concept of bile duct mucous membrane barrier, the different pathological bile and different concentration bile salts, bile acid intervention people benign scar tissue of the bile duct fibroblasts, bile duct epithelial cells; Build pig bile duct mucous membrane barrier damage and bile duct scar stricture animal model, this paper discusses the mucous membrane barrier bile duct in the role of benign bile duct scar stricture; Developed by hydroxypropyl chitosan paclitaxel slow-release film; Omental itself has bile leakage prevention and control, promote the healing of bile duct role, because of its also has the parcel fixed effect, perioperative, can be fixed in bile duct drug injury repair parts and play a role, and consider using a drug slow-releasing technology and long-term drug use difficult to solve, proposed by the animal study omental package homemade hydroxypropyl chitosan membrane prevention slow-release paclitaxel bile duct scar, for clinical comprehensive prevention and control benign bile duct scar stricture to provide the evidence and theoretical basis. This study has good research foundation, practical strong, for groundbreaking work, innovative, with extensive clinical application.

胆管瘢痕狭窄是胆道外科复杂而棘手的难题；胆道局部给药和重复给药困难、胆汁内环境的影响是制约胆管瘢痕防治的主要因素。本研究拟在前期系列研究的基础上，首次提出胆管黏膜屏障的概念，研究不同病理胆汁以及不同浓度胆盐、胆酸干预人良性胆管瘢痕组织的成纤维细胞、胆管上皮细胞；建立猪胆管黏膜屏障损伤和胆管瘢痕狭窄的动物模型，探讨胆管黏膜屏障在人良性胆管瘢痕狭窄中的作用；自行研制羟丙基壳聚糖紫杉醇缓释膜；大网膜本身具有防治胆漏、促进胆管愈合的作用，因其还具有包裹固定作用，术中可将药物固定在胆管损伤修复部位而发挥作用，同时考虑采用药物缓释技术和长效药物解决用药困难，拟通过动物实验研究大网膜包裹自制羟丙基壳聚糖紫杉醇缓释膜防治胆管瘢痕，为临床综合防治良性胆管瘢痕狭窄提供实验依据和理论基础。本研究具有较好的研究基础，实用性强，为开创性工作，具有创新性，有广泛临床应用前景。

项目背景：良性胆管狭窄（BBS）的治疗一直是胆道外科难题。目前紫杉醇在治疗冠状动脉狭窄、青光眼术后疤痕及BBS方面疗效肯定，同时发现紫杉醇溶液存在渗透能力弱、作用时间短等缺陷。局部应用以壳聚糖为载体的药物缓释系统，具有能将药物释放到指定部位、保持有效浓度、减小副作用等优点。因此我们设想多学科融合研发紫杉醇壳聚糖缓释膜，干预BBS形成。主要研究内容：制备羟乙基壳聚糖紫杉醇缓释膜；研究胆汁、紫杉醇对BBS组织中成纤维细胞作用；胆管黏膜屏障在BBS形成的作用机制；大网膜包裹羟乙基壳聚糖紫杉醇缓释膜对BBS作用研究。重要结果、数据及意义：(1)成功研发多种紫杉醇缓释膜,对紫杉醇-N-琥珀酰羟乙基壳聚糖缓释膜进行了红外、核磁、GPC分子量及元素分析检测。(2)对缓释膜进行了一系列理化及生物学性质检测，阐明置入体内的安全性及可行性。(3)体外释放性能发现，药物释放速率与交联度正相关，膜片（1:80交联度）第5、7、15和30天累计释放理论载药量（80μg）的9.2%、11.3%、13%和14.6%，说明该膜片体外能长期、少量释放紫杉醇。(4)培养了人BBS成纤维细胞（FBS），优化了胆管上皮细胞（BEC）培养条件，发现EGF、HGF联合能长时间维持BEC形态，为BBS研究提供了合适的细胞模型。(5)发现游离胆汁酸（CA、DCA）可促进细胞生长，增强细胞活力，提示胆汁酸在BBS形成中扮演重要角色。(6)缓释膜对FBS和BEC的干预中发现，BBS可能是EMT和肌成纤维细胞增殖共同作用的结果，缓释膜对FBS的抑制率高于紫杉醇溶液。TGF-β1通过Smad2/3信号诱导BEC发生EMT，缓释膜可抑制EMT，且药效、时间强于紫杉醇溶液。（7）LPS刺激FBS和BEC后均能产生IL-6、IL-8和TNF-α等免疫性细胞因子，提示胆道具有免疫屏障功能，推测屏障中BEC与瘢痕纤维化相关。（8）通过缓释膜对兔BBS模型的干预，发现缓释膜可抑制由胆管损伤修复诱发的EMT及纤维化。通过该项目研究，我们阐明FBS、BEC、胆汁酸及胆管免疫屏障都参与了BBS形成，研发紫杉醇壳聚糖缓释膜干预BBS并取得良好效果，为临床防治及今后多方面应用提供了新思路。