EGFR突变型肺癌对EGFR-TKIs原发性耐药的基因组序列变异研究

表皮生长因子受体(EGFR)突变能够预测分子靶向药物EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)的疗效，这是二十一世纪肺癌治疗领域的重大进展，TKI治疗EGFR突变型肺癌的有效率高达70%，然而，另外30%对TKI治疗无效（即：原发性耐药）的机制尚不清楚，T790M突变、KRAS突变可能参与原发性耐药。我们率先报导了cMET扩增、ALK融合与原发性耐药相关；通过全基因组测序，我们还发现一些新的基因序列变异也是潜在的原发性耐药标志物。本研究将在60对敏感标本和原发性耐药标本中同时检测cMET扩增、ALK融合、T790M突变和KRAS突变，确定这些耐药标志物在原发性耐药中的作用，进而，采用深度测序技术对敏感和耐药标本进行全基因组序列分析，通过对比敏感与耐药标本的基因组序列差异，发现并鉴定导致原发性耐药的序列变异，从基因组序列水平阐明原发性耐药的机制，为准确预测TKI疗效、开发克服耐药的新药提供依据。

表皮生长因子受体(EGFR)活化突变是肺癌最常见的驱动基因，同时也是EGFR酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）最重要的疗效预测因子，EGFR-TKI治疗EGFR突变型肺癌的有效率高达70%，然而，另外30%对EGFR-TKI治疗无效（即：原发性耐药）的机制尚不清楚。本研究从全基因组深度测序、EGFR突变丰度动态量变以及单细胞水平突变异质性等方面探讨原发性耐药机制。.（1）对8对16份肿瘤组织标本进行全基因组深度测序，发现bim缺失多态性与原发性耐药相关，进而在30例患者中验证了这一发现，检测到bim缺失多态性的患者对TKI的疗效较差，文章发表于《lung cancer》中（IF=3.5分）。此外，还发现EML4-ALK融合基因可与EGFR突变共存，EML4-ALK通路磷酸化影响TKI疗效导致原发性耐药。文章发表于《clinical cancer research》中（IF=8.1分）。两篇关于高通量测序技术和肺癌原发性耐药标志物的文章发表于《中国肿瘤临床》和《肿瘤研究与临床》。 .（2）对8例患者45份外周血进行二代测序，4例原发性耐药患者中 3例检出耐药突变PIK3CA H1047R, E545K and Q546K mutations，随TKI治疗丰度明显升高，其中两例还同时伴有T790M突变，另外1例患者伴随PTEN Q245X突变。.（3）采用qPCR法检测了80例患者连续血浆的突变丰度，发现两种变化类型，上升型和稳定型，后者对TKI的疗效较差，该研究成果被2015年第16届世界肺癌大会收录为oral presentation，全文投稿JAMA（稿件编号JAMA16-0624）。.（4）选取了6例患者，激光捕获显微切割仪捕获单个肿瘤细胞，通过单细胞测序发现原发性耐药患者的EGFR突变状态存在更大的异质性，与敏感型患者相比有显著性差异，EGFR突变异质性为原发性耐药的机制之一。该研究成果被2015年16届世界肺癌大会收录为oral presentation。. 除以上学术研究成果外，本课题组培养硕士研究生3人，技术人员4人。基于本课题研究成果，2015年获得另一项国自然面上项目“基于血浆ctDNA多基因动态定量检测的EGFR-TKI耐药机制研究”（81572282），使研究内容得以深入和延续。