APL细胞中砷结合蛋白的鉴定及相关的三氧化二砷靶点蛋白的研究

APL细胞中与砷直接结合的蛋白在三氧化二砷（As2O3）的治疗机制有重要意义。APL细胞中哪些蛋白可与砷直接结合？砷结合蛋白在As2O3治疗机制中有何作用？这些问题尚待回答。我们在前期工作中，以生物素标记的三价砷作分子探针，通过生物素-亲和素反应钓取NB4细胞中的砷结合蛋白，通过基于质谱技术的蛋白质组学分析得到40种砷结合蛋白；综合分析蛋白质结构、以及As2O3与蛋白结合的特点，筛选出2个重点蛋白和数种备选蛋白。下一步计划：通过Western-Blot方法和竞争实验，对质谱分析结果进行确证；构建蛋白突变体作对照，确定砷是否与蛋白直接结合以及砷结合位点；检测As2O3处理后NB4细胞相关通路上下游分子变化，了解As2O3对相应通路的作用；在APL原代细胞中对砷结合蛋白及As2O3对相关蛋白的影响进行确证。本研究将为全面和深入了解As2O3治疗APL的分子机制提供新的切入点。

APL细胞中与砷直接结合的蛋白对于三氧化二砷（As2O3）的治疗机制有重要意义。APL细胞中哪些蛋白可与砷直接结合？砷结合蛋白在As2O3治疗机制中有何作用？这些问题尚待回答。我们以生物素标记的三价砷作分子探针，通过生物素-亲和素反应钓取NB4细胞中的砷结合蛋白，通过基于LC-MS/MS质谱技术的蛋白质组学分析得到的砷结合蛋白。通过探针技术和蛋白质组学技术，我们获得了40余种砷直接结合蛋白。在蛋白质组学数据基础上，我们选取了GSTP1、HSPA9和PKM2作为进一步研究目标蛋白对质谱结果进行验证。在验证基础上，确认PKM2是有效的砷直接结合蛋白。进一步, 我们以PKM2为深入研究目标，对于As2O3与PKM2的结合位点、As2O3对PKM2活性影响进行了深入研究。本研究初步鉴定出40余种可能的砷直接结合蛋白，发现PKM2与As2O3有着较高的直接结合力，As2O3通过直接结合的方式影响了PKM2的活性，可能是As2O3对APL细胞的氧化杀伤效应的启动因素。本研究为全面和深入了解As2O3治疗APL的分子机制提供新的切入点。