蛋白酶体调节性亚单位10（PSMD10)参与多发性骨髓瘤对硼替佐米耐药性的形成及其分子机制的实验研究

The proteasome inhibitor bortezomib (BTZ) has gained a cornerstone position in the treatment of multiple myeloma. However, the therapeutic efficacy of BTZ is hampered by the emergence of acquired resistance, for which the molecular mechanisms should be identified. We have developed a novel Protein Turnover assay (ProTA). The subsequent protein degradome analyses delineate potential molecular basis for BTZ resistance . Remarkably, BTZ stabilizes proteasome subunit PSMD10, suggesting a novel mechanism for leading to BTZ resistance. In this study, we will focus on the relation between PSMD10 protein and BTZ resistance. We will over-express the PSMD10 in MM cells to test the relation between PSMD10 level with BTZ resistance, and we will use RNAi-dependent silencing of PSMD10 in BTZ-resistant MM cells to restore the BTZ sensitivity. And then, proteasome activity and gene mutation of PSMD10 will be detected in BTZ-resistant MM cells. Based on the above studies, we will investigate the protein stability of PSMD10 and the mechanism of PSMD10 degradation in BTZ resistant MM cells. Our study will be helpful to elucidate the new mechanism of BTZ resistance and to develop the new therapeutic strategies.

多发性骨髓瘤（MM）对硼替佐米（BTZ）的耐药影响临床疗效，机制亟待阐明。我们利用独立首创的新技术ProTA，首次描述了BTZ作用下细胞内蛋白质降解组学变化，并对BTZ耐药的机制进行了研究。前期工作中我们发现：蛋白酶体调节性亚单位10（PSMD10）蛋白稳定性增强、水平升高与BTZ耐药有关。因此我们提出“PSMD10蛋白参与了MM细胞对BTZ耐药”的科学新假说。下一步计划：通过过表达基因转染上调、和RNA干扰下调两种手段，从正反两个角度研究并确证PSMD10蛋白与BTZ耐药性的关系；同时，以蛋白酶体活性为切入点研究PSMD10上调导致BTZ耐药的机制，并在BTZ耐药的细胞株和原代细胞中对PSMD10与BTZ耐药的关系进行验证；进一步，从蛋白稳定性和蛋白降解途径的角度对BTZ耐药细胞中PSMD10蛋白稳定性增高及机制进行探讨。本研究将为揭示BTZ耐药新机制、开发克服耐药新策略提供理论依据。

多发性骨髓瘤（MM）对硼替佐米（BTZ）的耐药影响临床疗效，机制亟待阐明。我们在前期工作中发现蛋白酶体调节性亚单位10（PSMD10）蛋白稳定性增强、水平升高与BTZ耐药有关。因此我们提出“PSMD10蛋白参与了MM细胞对BTZ耐药”的科学新假说。在本研究中，我们主要探讨了PSMD10作为MM治疗靶点的潜力，以及调节PSMD10表达对MM肿瘤生物学特性的影响。我们构建了慢病毒介导的靶向PSMD10的shRNA，转染PRMI-8226细胞，通过RT-PCR、Western Blot等技术鉴定RNAi效果，下调了PSMD10的蛋白水平，结果发现下调PSMD10蛋白可以明显诱导MM细胞凋亡。本研究将为揭示BTZ耐药新机制、开发克服耐药新策略提供理论依据。.另外，我们还研究了NKT细胞体外扩增和caspase-3介导凋亡的关系；在病人原代细胞中耐药基因表达谱的研究在进行中。.本研究发表研究论文多篇，培养硕士研究生1名，参与培养硕士博士研究生各一名。