应用噬菌体展示技术构建广谱强效重组噬菌体的研究

In view of the increasingly severe drug resistance of burn infection pathogens, there is a lack of sensitive antibiotics. As a traditional anti-infection therapy, phage therapy has been paid more attention by many countries all over the world. Due to the specificity of phage, the host spectrum of phage is too narrow, which is the biggest obstacle to its wide application. The phage lytic enzyme system plays a key role in the control of double stranded DNA phage going through the host bacteria. This project is to combine together corresponding functional domains of capsular polysaccharide depolymerase, endolysin and holing from different phage lytic enzyme systems through phage display technology and express them on the surface of T7 phage. New re-constructed phage particles are directly collected after host bacteria phage infection; And the antibacterial spectrum, antimicrobial activity, physical and chemical stability of the new phage will be tested. The goal of this project is to eventually obtain potent new phage with broad-spectrum and high stability; apply the new phage to treat burn infection, and lay the foundation for of developing new antibacterial reagents.

烧伤感染病原菌耐药状况日趋严重，临床上针对泛耐药病原菌缺少敏感的抗菌药物，因此噬菌体治疗作为一种传统的抗感染治疗方法，再次引起世界各国的重视，部分国家已经进入临床实验研究。由于噬菌体的特异性导致宿主谱太窄，是广泛应用的最大障碍。噬菌体裂菌酶系统在控制双链DNA噬菌体进出宿主菌的过程中发挥了关键作用。本课题应用噬菌体展示技术将不同宿主噬菌体裂菌酶系统中的表面多糖解聚酶、内溶素及穿孔素的相应功能域融合在一起，表达于T7噬菌体表面，通过噬菌体感染宿主菌后直接收集重组的噬菌体颗粒；筛查该噬菌体制剂的抗菌谱、抗菌活性及对理化因素的稳定性，最终获得广谱、高效、稳定的新型噬菌体；进而将该制剂用于烧伤感染的治疗，为开发新型抗菌药物奠定基础。

烧伤感染病原菌耐药状况日趋严重，临床上针对泛耐药病原菌缺少敏感的抗菌药物，因此噬菌体治疗作为一种传统的抗感染治疗方法，再次引起世界各国的重视，部分国家已经进入临床实验研究。由于噬菌体的特异性导致宿主谱太窄，是广泛应用的最大障碍。噬菌体裂菌酶系统在控制双链DNA噬菌体进出宿主菌的过程中发挥了关键作用。本课题应用噬菌体展示技术将不同宿主噬菌体裂菌酶系统中的表面多糖解聚酶、内溶素及穿孔素的相应功能域融合在一起，表达于T7噬菌体表面，通过噬菌体感染宿主菌后直接收集重组的噬菌体颗粒；筛查该噬菌体制剂的抗菌谱、抗菌活性及对理化因素的稳定性，最终获得广谱、高效、稳定的新型噬菌体；进而将该制剂用于烧伤感染的治疗，为开发新型抗菌药物奠定基础。课题组调查了烧伤病房感染细菌分布特点，确定了通过医院污水筛选针对多耐药病原菌噬菌体的策略；成功筛选了泛耐药鲍曼不动杆菌噬菌体abp2，碳青霉烯耐药的肺炎克雷伯菌噬菌体ksskp3等，研究了他们的基因组特点，及治疗安全性和有效性；深入研究了噬菌体abp1对宿主菌的相互作用，并且成功分离出铜绿假单胞菌噬菌体pap3中的早期蛋白gp68将其应用于T7噬菌体展示体系，发现其可以抑制宿主菌分裂，降低宿主菌毒力。该课题目计划目标已顺利完成，将为噬菌体工程改造后更安全的应用于抗感染领域提供思路。