CCR7联合B7-DC RNAi共转染未成熟树突状细胞诱导烧伤小鼠皮肤移植免疫耐受的研究

如何延长同种异体皮肤存活时间是烧伤创面修复领域的主要问题之一。本项目组前期工作已证实CCR7基因转染未成熟树突状细胞(imDCs),可增强imDCs迁移及免疫耐受能力,但CCR7基因转染促使imDCs部分向成熟分化,影响了诱导免疫耐受功能的发挥。如何使CCR7基因转染imDCs后仍保持较强的免疫耐受功能是尚待解决的问题。本项目根据T细胞激活有赖于抗原递呈细胞表面B7分子,采用基因共转染和RNAi技术,将CCR7和B7-DC RNAi基因共转入供者源imDCs，使imDCs在具有自动归巢受者淋巴结作用的同时,又保持较强的免疫耐受功能。观察imDCs转染前后CCR7及B7-DC 表达情况；建立小鼠皮肤移植模型,在同种异体皮肤移植同时,将这种转染CCR7和B7-DC RNAi基因的imDCs输入移植的受体内,诱导更强的T细胞特异性免疫耐受,为延长异基因皮肤移植的存活时间提供一个新方法。

树突状细胞(DC)是一种功能强大的抗原提呈细胞，DC能够携带抗原信息，从外周器官迁移到淋巴组织的T淋巴细胞区，将抗原提呈给T淋巴细胞，激活活化初始T淋巴细胞。同时，DC可以通过诱导形成调节性T淋巴细胞，细胞克隆删除和删除记忆性T细胞，在形成免疫耐受和免疫排斥中起着重要作用。这就使DC作为一种治疗方法在移植中探索应用。在动物实验中，输入捐助者或接收者来源的耐受性DC，可以更广泛地延长移植物的存活。在临床实验中，DC在移植中也开始应用，但仍存在很多问题需要解决，包括细胞的分离和纯化技术，细胞的来源和途径，以及如何靶向性的诱导免疫耐受等。我们试图通过腺病毒转染CCR7基因使供者源imDC的CCR7表达上升，增强imDCs的迁移及免疫耐受能力，但腺病毒转染imDC 也会部分促使imDC 向mDC分化，使共刺激分子升高，共刺激分子通过与相应受体结合，可为T细胞激活提供第二信号，再通过引T细胞分化和相关细胞因子分泌等，对机体免疫起着正性作用，影响了诱导免疫耐受功能的发挥。RelB基因能够调节共刺激分子的表达，下调RelB基因，能够下调共刺激分子。为更好的发挥供者源imDC 的作用，我们尝试同时转染上调CCR7基因和下调RelB基因，使imDC有着较高迁移性的同时表达较低共刺激分子，更好的诱导形成免疫耐受，从而为延长同种异体皮肤的存活时间提供一个新的思路和方法。通过共转染CCR7腺病毒和RelB-SiRNA，我们诱导成了既有较高迁移功能的imDC，在迁移过程中，这种imDC受到炎症刺激，也能够表达较低的共刺激分子，从而能够更好的诱导免疫耐受，为进一步动物实验奠定良好的基础。我们用外周血获得的树突细胞经过IL-10诱导有着未成熟树突细胞的特性，即使受到TNF-α刺激，也能保持未成熟特性。这种方法可以用来体内大批量扩增未成熟树突细胞，为以后临床治疗，比如大面积烧伤皮肤移植中诱导免疫耐受提供良好的基础。未成熟树突细胞有着较好的抗原递呈能力，但随着递呈，树突细胞会变成熟。同时，我们发现来源于第三者的树突细胞，载有宿主的抗原，输入小鼠体内能够建立对同种异体皮肤的免疫耐受。