visfatin 通过RAS调控大鼠肾小球系膜细胞细胞外基质的表达

糖尿病肾病（DN）是糖尿病的严重微血管并发症之一，促炎细胞因子及肾素-血管紧张素系统对其发病起重要作用。本项目在前期工作观察到促炎因子Visfatin以时间及浓度依赖的方式改变RAS表达基础上，拟通过转基因技术激活低糖培养的肾小球系膜细胞Visfatin表达，观察以candesartan阻断RAS后，Visfatin对系膜细胞促纤维化分子、ECM表达的影响，以了解Visfatin是否通过激活RAS促进肾脏ECM沉积；并应用RNA干扰技术降低高糖培养的系膜细胞Visfatin表达后，观察高糖培养对肾素-血管紧张素系统各组要成员活性水平的影响，以探讨Visfatin是否介导高糖培养大鼠肾系膜细胞RAS激活。从而促进DN进展的假说，探寻DN发病机制及防治策略。

糖尿病肾病是终末期肾病的主要发病原因，其确切发病机制不明。糖尿病时，系膜细胞增殖并合成大量细胞外基质，促进肾脏病变进展，visfatin能促进肾脏固有细胞表达促纤维化分子及细胞外基质。而visfatin以何种机制参与糖尿病肾病的发病尚待研究。.肾素血管紧张素系统的过度激活是糖尿病肾病发生发展的重要机制之一。我们前期的研究已经证实外源性给予visfatin，可激活肾脏局部肾素血管紧张素系统表达，如此推断，visfatin是否通过激活肾素血管紧张素系统而参与糖尿病肾病发病呢？本课题以大鼠肾小球系膜细胞为模型，研究高糖状态下visfatin对肾素血管紧张素系统表达的调节作用，并进一步研究visfatin对细胞外基质表达的调节作用，阐明局部肾素血管紧张素系统激活在visfatin参与糖尿病肾病发病中的可能作用。.本研究体外培养大鼠肾小球系膜细胞，观察高糖及visfatin对肾素血管紧张素系统及细胞外基质、促纤维化因子表达的影响;并使用血管紧张素II特异性抑制剂抑制肾素血管紧张素系统后，观察高糖及visfatin对细胞外基质、促纤维化因子的影响。得到以下结果：.（1）用高糖或visfatin刺激系膜细胞，AGT、AT1R、肾素和Ang II的表达均明显升高；在高糖培养的细胞中，转染visfatin沉默质粒的细胞AGT、AT1R mRNA和蛋白相对表达量、肾素和Ang II活性较对照组显著降低； AT2R、ACE的表达量在高糖刺激或转染visfatin高表达质粒后与对照组比较均无统计学差异。.（2）高糖和visfatin均可刺激肾小球系膜细胞中细胞外基质与促纤维化因子的表达；AT1R特异性抑制剂Candesartan处理后，转染了visfatin高表达质粒的细胞中细胞外基质与促纤维化因子的表达与正常对照组比较无统计学差异；而转染了visfatin沉默质粒的细胞中细胞外基质与促纤维化因子的表达量较对照组表达更低。AT2R抑制剂PD123319不能降低visfatin高表达细胞中细胞外基质与促纤维化因子的表达量。.本研究发现抑制visfatin的表达可以阻断高糖诱导的RAS激活，提示visfatin参与高糖诱导的RAS激活；Visfatin通过激活肾素-血管紧张素系统的表达诱导细胞外基质及促纤维化因子的分泌，此作用由AT1R介导而不依赖于AT2R。