大鼠精子生成过程中细胞周期监测点的功能研究

目前全球男性不育的发生率成锐增趋势，其中大部分为少、弱精患者，原因为各种致病因素导致精子生成过程中增殖减少而凋亡增加，但目前国内外关于精子发生水平的细胞周期调控研究并不多，病理环境下的精子细胞修复或凋亡的细胞周期调控研究还未开展。申请人从其结果中发现细胞周期激酶1（CHK1）在少∕弱精患者中的表达明显降低，为进一步探究CHK1在精子发生过程中的作用机理，拟进行以下研究：.1.利用RNAi干扰技术，构建CHK1特异的短发夹RNA质粒载体，并转染大鼠精原细胞制备CHK1基因沉默大鼠；2.射线照射等方法造成大鼠精子DNA的损伤，检测大鼠精原细胞CHK1、ATM、ATR、CHK2、P53、BRCA1和CDC25C蛋白等细胞周期监测点基因的表达，并对精原细胞进行细胞周期分析和凋亡检测。本研究有助于了解精子发生阶段的细胞周期调控，尤其是在病理环境下的修复或凋亡的调控。

目的：研究大鼠精子生成过程中细胞周期监测点蛋白CHK1的表达与意义。方法：采取1 日龄、30 日龄和成年( 3个月) 鼠的睾丸组织，利用免疫组化等方法检测ATM、CHK1 等细胞检测点蛋白在不同发育阶段大鼠的睾丸、附睾等组织的表达，bouin's液固定， 常规石蜡包埋， 每个标本行连续切片，厚6μm，应用SP法，用CHK1多克隆抗体对睾丸与附睾组织切片进行染色，采用方差分析检验不同年龄组大鼠CHK1蛋白表达的差异。初步结果：随着大鼠年龄的增长，CHK1蛋白在大鼠睾丸及附睾组织中的表达水平明显增高， 初步结论： CHK1蛋白在精子的发生发展过程中起重要作用。