氯离子通道蛋白ANO1在食管鳞癌细胞增殖中的作用机制研究

Currently, no targeted drugs special for esophageal cancer are used in clinical practice, because the driven genes and tumorigenic mechanisms of esophageal cancer are unclear. Our previous study showed that chloride channel protein ANO1 was amplified and overexpressed in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC), and its overexpression was significantly associated with lymph node metastasis. Knockdown of ANO1 in esophageal cancer cells could significantly inhibit cell proliferation in vitro and down-regulate the expression of MCM7. Restoration of MCM7 expression could rescue the inhibitory effect of ANO1 knockdown on cell proliferation. However, the mechanism of ANO1 regulating esophageal cancer cell proliferation via MCM7 and whether the promoting role of ANO1 on cell proliferation was dependent on its chloride channel function are still unknown. Basis on the preliminary findings, we will investigate the regulatory mechanisms between ANO1 and MCM7, inhibitory effects of ANO1 siRNA and its inhibitor on ESCC cells, and relationship between ANO1, MCM7, related proteins and clinical parameters. This project can reveal the molecular mechanisms of ESCC formation, and also provide candidate molecular targets for the therapy of ESCC.

目前临床上没有针对食管癌的靶向药，其原因是食管癌癌变过程中的驱动基因及其致癌机制尚不明确。我们前期发现氯离子通道蛋白ANO1在食管鳞癌组织中扩增且过表达，并且其过表达与淋巴结转移相关。功能研究发现敲降ANO1可显著抑制食管鳞癌细胞的增殖能力，并下调MCM7的表达。在敲降ANO1的食管鳞癌细胞中回复MCM7的表达可显著逆转敲降ANO1对细胞增殖的抑制作用，但ANO1如何调控MCM7的表达和ANO1的促增殖作用是否依赖其氯离子通道活性尚不清楚。基于此，本项目拟综合运用分子、细胞生物学技术，在细胞、动物模型及食管鳞癌组织水平对ANO1调控MCM7的分子机制，ANO1的siRNA和抑制剂的抑瘤作用以及ANO1、MCM7和相关蛋白与临床参数的关系进行研究，本项目的实施将揭示ANO1在食管鳞癌细胞增殖中的作用及详细调控机制，为阐明食管鳞癌的发生机理提供理论依据，为食管鳞癌的治疗提供候选分子靶点。

食管癌是世界十大恶性肿瘤之一，其发生发展的分子机制尚未阐明。ANO1（Anoctamin 1）是一个钙离子激活的氯离子通道蛋白，广泛表达于分泌上皮、平滑肌和感受神经元等，参与调节肠道蠕动、内分泌腺的分泌、平滑肌收缩和痛觉产生等多个过程。ANO1在多种肿瘤中过表达，并且影响肿瘤细胞的增殖、转移和裸鼠成瘤能力，但其分子机制尚未明确，尤其ANO1调控食管癌细胞增殖的分子机制还不清楚。因此本课题重点研究了ANO1对食管癌细胞恶性表型的影响和调控的分子机制。我们前期发现氯离子通道蛋白ANO1在食管鳞癌组织中扩增且过表达，并且过表达与淋巴结转移相关。功能研究发现敲降ANO1显著抑制食管癌细胞的增殖能力并下调MCM7的表达，在敲降ANO1的食管鳞癌细胞中回复MCM7的表达可以显著逆转敲降ANO1对细胞增殖的抑制作用。本课题进一步研究了ANO1在食管癌中的作用机制。我们研究发现抑制ANO1的氯离子通道活性可以抑制食管癌细胞的增殖能力、克隆形成能力、运动能力和侵袭能力，并抑制NF-kB信号通路的活性；沉默ANO1下游关键分子MCM7可以抑制食管癌细胞的增殖能力、克隆形成能力和运动能力，并抑制AKT1和mTOR信号通路；ANO1通过E2F1调控MCM7的表达；ANO1抑制剂T16Ainh-A01具有抑制食管癌细胞裸鼠成瘤能力的作用；食管癌中ANO1与E2F1和MCM7的表达呈正相关，且ANO1高表达与食管鳞癌患者的不良预后相关。这些发现进一步阐明了ANO1在食管癌细胞增殖和运动中的分子机制，并为食管癌的治疗提供候选的分子靶点。