USP2基因转染对系膜细胞饰胶蛋白聚糖表达及生长的影响

饰胶蛋白聚糖（DCN）对肾小球系膜细胞（MsC）的生长有明显的抑制作用，因此是一个对以系膜增生为特征的肾炎有潜在治疗价值的重要靶点。DCN的降解主要由泛素-蛋白酶体途径介导，因此，通过该途径的负反馈调节机制- - 寻找DCN特异性去泛素化酶是稳定DCN表达以及调节MsC生长的有效手段。本课题通过免疫共沉淀、激光共聚焦和质谱分析明确DCN与USP2的结合；通过体外USP2基因转染、USP2 RNA干扰MsC以及经电穿孔介导的裸质粒注射法将USP2基因靶向转染大鼠抗Thy-1.1肾炎模型体内MsC，研究其对大鼠MsC DCN稳定表达及生长的影响；同时，通过人肾活检标本的免疫组化检测来观察USP2及DCN表达与肾小球系膜增生的相关性，从理论和技术上为改善和阻止以系膜增生为表现的肾病的发生发展，来寻找针对新的靶点为目标的基因干预治疗提供实验依据。

本项目通过Western blot、免疫共沉淀、基因转染等方法，证实了USP2-69在大鼠肾MC内高表达，USP2-45和USP2-69均能与DCN结合，但仅USP2-69对DCN有去泛素化的作用，并经此作用调节DCN下游效应分子TGF-β1和Col IV的表达；USP2-45能促进MC凋亡，但对MC生长无明显作用，而USP2-69既能促进MC凋亡，又能促进MC生长，其调节系膜细胞生长的作用具有两面性；炎症因子TGF-β1刺激下，USP2-45和USP2-69均表现为先降低后升高的趋势，且与DCN表达趋势一致，在各型肾小球肾炎中，USP2-69的表达与以系膜增生为特征的肾小球肾炎关系密切；因此我们选取USP2-69作为治疗系膜增生性肾小球肾炎的靶点。接着，我们成功制备大鼠抗Thy1.1肾炎模型，在此基础上，经过多次动物实验，证实了经电穿孔介导的裸质粒注射实验方法的可行性以及DCN裸质粒注射对系膜增生性肾小球肾炎的拮抗作用；USP2-69裸质粒注射的相关实验仍然在进行之中。此外，通过质谱分析，我们探索了另一与DCN关系密切的去泛素化酶：OTUB1，其在炎症刺激下高表达，过表达OTUB1能促进DCN的泛素化和降解，从而在系膜增生性肾小球肾炎的发病机制中发挥一定作用。本项目至2012年12月31日为止，共发表SCI论文一篇、国内核心杂志综述一篇、投稿参加全国病理学年会2次，另有一篇论文已投稿PLoS ONE.