复方叶下珠对URG11介导HBV相关HCC的β-catenin/Wnt作用

Early clinical studies find that Compound Phyllanthus Urinaria L (CPUL) can prevented HBV related with hepatocarcinogenesis, reduced serum URG19 and URG11 positive rate. Experiments verification of CPUL can inhibited the expression of URG19 in vivo and in vitro, but URG11 efect hepatocellular carcinogenic mechanism, it is not clear? This aim is to determine CPUL whether to direct inhibit tumor cell proliferation. Base on URG11 carcinogenic research that initate the classic Wnt/beta-catenin signaling, put forward a hypothesis that CPUL may also inhibit expression of URG11 and β-Catenin/Wnt signaling. First establish HBx, URG11 transfection HepG2 cell model, and used mothed of the Northern blot, Western blot, immunoprecipitation,pTOPFLASH, Powerblot analysis to detect the expression of URG11, and the related effector of signaling,comparison with transfected siRNA .Secondly based on the main pathogenesis of HCC on traditional Chinese medicine (TCM) that are deficiency of blood ,blood stasis, poison and wet, set up CPUL that restore vital energy and Blood act stasis remove, intervent expression of URG11 and Wnt/β-catenin signaling in cell lines and nude mice. This studies that enriched the HBxAg mediated related HCC carcinogenic pathogenesis, and probe into the compound TCM has early cancer prevention and antitumor effect of multipe target.

早期临床研究发现：复方叶下珠能减少血清中URG19和URG11阳性率，防止乙肝相关肝癌的发生。并在实验室证实了叶下珠能抑制URG19表达，但对URG11致癌的机理尚不清楚。弄清其机理是为了了解复方叶下珠是否具有直接抑制肿瘤细胞增殖的作用。基于URG11激活β-Catenin/Wnt信号的事实，提出了复方叶下珠能抑制URG11及其β-Catenin/Wnt信号作用的假说。首先建立HBx、URG11转染HepG2细胞模型，采用Northern、Western bolot、pTOPFLASH、Powerblot方法等，以瞬间共转染siRNA为对照，在体内外检测URG11及激活β-Catenin/Wnt信号。其次基于肝癌的关键病机虚、瘀，湿毒，设计的补气化瘀复方叶下珠对这一致癌途径干预的研究。本项目充实了HBxAg介导的相关肝癌机理的研究，探究了复方中药早期且多途径的防治肝癌作用。

肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma, HCC）目前仍是严重威胁人类生命健康的重大问题，复发转移是影响其临床疗效的关键环节。复方叶下珠由叶下珠、半枝莲、黄芪、莪术、山慈菇五味中药组成，是深圳市中医院肝病研究中心在长期临床与科研实践总结的经验方，申报国家专利 （申请号：201610517509.2）。前期已开展相关临床观察，结果显示复方叶下珠可延缓乙肝相关性肝癌进展，甚至阻止癌细胞的转移，然而，其抗癌与转移作用和机制尚不清楚。本研究发现，复方叶下珠可显著抑制乙肝相关性肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。网络药理学和生物信息学综合分析乙肝相关性肝癌临床标本，预测Caveolin-1可能作为复方叶下珠主要靶点之一，介导其抗转移作用，且Wnt/β-catenin通路可能是复方叶下珠抗乙肝相关性肝癌的核心机制之一。进一步实验表明，HBx基因的稳定转染上调了HepG2、Huh-7细胞中β-catenin、Wnt-1及URG11的蛋白表达，而复方叶下珠的干预可以下调HepG2-HBx、Huh-7-HBx细胞中β-catenin、Wnt-1及URG11、HBx蛋白的表达。此外高表达Caveolin-1细胞株可通过稳定β-catenin促进乙肝相关性肝癌的转移，而复方叶下珠可诱导Caveolin-1自噬降解，通过泛素激活Akt/ Gsk3β介导的β-catenin蛋白酶体降解，从而减弱Caveolin-1的转移促进作用。此外，我们还通过体内和体外实验进一步证实了复方叶下珠的抗增殖转移作用。在小鼠肝癌移植和斑马鱼异种移植模型中，复方叶下珠均能抑制乙肝相关性肝癌的生长和转移。综上所述，我们的研究提示复方叶下珠可有效抑制HBx,URG11, Caveolin-1与Wnt/β-catenin参与恶性肿瘤的转移过程，强调了复方叶下珠在抑制乙肝相关性肝癌转移的功能，有助于探寻乙肝相关性肝癌治疗的新靶点、新途径，提高乙肝相关性肝癌生存率及生存质量，为临床治疗提供更好的理论支撑。