逆向筛选落萼叶下珠中协同拉米夫定抗HBV活性成分的研究

Chronic hepatitis B (CHB) is a progressive disease that leads to the severe menace to human health. Currently the predominant mode of treatment for patients with hepatitis B is inhibition of virus replication, however, the virus can’t be totally eliminated. This situation for long-term use of antiviral drugs is more likely caused virus mutation and drug-resistant, which has become the main factor for frequent failure. Clinically used drugs in treatment of CHB, combined with new high potency and low toxicity candidate constituents, might work synergistically to enhance the activity of the natural anti-HBV agents according to their different targets and mechanisms. Based on the above theory, a known anti-HBV agent will be added to each sample for retro-screening synergistic compositions from the TCM herbs Phyllanthus flexuosus by chromatographical fractionation and purification monitored by activity. Further understand the synergistic interaction of anti-HBV agents, has clinical significance for prevention and delaying arrival of HBV resistant mutants, and lay the foundation of the rational utilization and development of TCM.

乙型肝炎是一种威胁人类健康的进展性疾病。目前治疗慢性乙肝病毒感染的药物多数是抑制病毒的复制，而不是彻底清除，这就需要长期服用抗病毒药物，而长期服用极易引起病毒变异和耐药，成为实现乙肝长期治疗目标的最大障碍。针对不同的抗HBV的靶位和机制，整合现有医疗资源和新的高效、低毒的抗病毒成分可以起到增效的协同作用。基于这一认识，本项目以抗乙肝植物药落萼叶下珠为研究对象，拟采用色谱分离和活性筛选相结合的方法，通过向受试样品中加入一定量已知抗乙肝病毒的药物来逆向筛选与之具有协同作用的活性成分。深入研究抗病毒药的协同作用，对防止或延迟乙肝病毒耐药株的产生具有重要临床意义和指导作用，也是合理开发利用中药资源的重要前提。

本项目以落萼叶下珠植物为研究对象，采用各种色谱分离技术，从中分离得到19个化合物，利用波谱和化学方法鉴定了其结构，主要为二萜、三萜、甾体、木质素、有机酸以及嘌呤类化合物，其中1个为新化合物。采用CCK-8方法，对分离得到的部分化合物分别进行了人肝癌细胞HepG2 和SMMC-7721的细胞毒活性测试，结果表明，从落萼叶下株中分离得到的cleistanthane二萜类化合物对两种人肝癌细胞株均显示出较好的活性。同时，本课题组以分离纯化得到的cleistanthane二萜类化合物为模板，首次合成了基于低共熔溶剂的阴离子交换树脂DES-AER，从而实现对落萼叶下珠中cleistanthane二萜成分的快速富集，DES-AER 作为一种潜在的功能性吸附材料，可尝试应用于食品、药物领域中生物活性成分的富集。此外，为从全新的角度阐述肿瘤发生的细胞分子机制提供依据，我们在国家自然科学基金的资助下，还开展了次氯酸、甲醛等生物活性小分子荧光传感器的构建及生物成像研究。本项目研究为落萼叶下珠的合理利用与开发提供了化学依据，为开发具有高效低毒的抗肝癌药物奠定了基础。