基于VDR信号通路探讨艾灸对UC肠道抗菌肽的调控机制研究

Ulcerative colitis (UC) is a steroid-refractory disease, and the pathogenesis of UC is closely related to vitamin D. Preliminary studies suggested that serum 1,25-OH)2-D3 and VDR concentrations were decreased in the UC group from the normal group. Acupuncture and moxibustion treatment regulated VDR signaling of colon tissue in UC rats and β-defensin peptides and REGs of colon tissue in patients with colitis. Based on the effectiveness of acupuncture and moxibustion on UC, this study further using histology, cytology, molecular biology and iTRAQ technologies and methods, to confirm that VDR signaling plays a role in UC mucosa injury and immune imbalance, to investigate regulation of the intestinal antibacterial peptide expression in UC, and to explore the role of IL-22/REGs axis in UC. To further explaining the effect mechanism of moxibustion on UC, and providing scientific evidence for acupuncture and moxibustion in the treatment of UC.

溃疡性结肠炎（UC）是一种难治性疾病，晚近发现维生素D与UC发病密切相关。前期研究结果提示UC大鼠的血清和结肠组织中维生素D活化形式的1,25-(OH)2-D3和维生素D受体（VDR）浓度降低，针灸能调控UC大鼠结肠组织VDR及结肠炎患者结肠组织中的抗菌肽（β-防御素和Reg家族）的表达。本项目拟从VDR信号通路、肠道抗菌肽与UC结肠黏膜炎症相关性为切入点，应用组织形态学、分子生物学、基因敲除和同重同位素相对与绝对定量等技术与方法，旨在从VDR信号通路中的初始应答基因的沉默，以及与溃疡性结肠炎结肠黏膜IL-22/Reg轴的异常激活的双向调控角度，阐释艾灸调控UC结肠黏膜VDR及抗菌肽（β-防御素和Reg家族）表达的机制，拟证实艾灸调节Th细胞分化、纠正溃疡性结肠炎结肠黏膜病变，以达到艾灸治疗和阻遏溃疡性结肠炎结肠黏膜炎症之目的，以期为艾灸治疗溃疡性结肠炎及临床应用提供实验资料和科学依据。

溃疡性结肠炎（UC）是一种难治性疾病，艾灸疗法具有疗效优势。晚近发现维生素D与UC发病密切相关。本项目拟从VDR信号通路异常、Th 细胞分化释放过多炎症因子、肠道抗菌肽的过表达与UC肠黏膜损伤性炎症密切相关为切入点，应用组织形态学、RT-qPCR、Western-blot、iTRAQ等技术与方法，结合VDR敲除小鼠，探讨VDR信号通路异常对Th细胞释放炎症因子IL-12/23p40增加，肠道抗菌肽表达异常的调控机制。1）UC正向研究结果提示：艾灸可下调UC大鼠血清IL-1β浓度，下调UC结肠组织IFN-γ mRNA表达，下调UC结肠组织NLRP3、ASC、NF-κBp65、P53、PUMA、TXNIP、CYP27B1、REG Iα、IL-22蛋白表达，上调UC血清IL-4浓度。2）UC反向研究结果提示：VDR基因敲除后，UC小鼠血清IL-6、IL-22、CRP浓度升高，UC小鼠结肠组织Claudin1、E-cadherin、ZO1蛋白表达降低，UC结肠组织Claudin2、IL-22、REG Iα蛋白表达升高，UC结肠组织Mcp1、Mip1、IL-22 mRNA表达升高。3）临床研究结果提示，艾灸能够缓解UC患者腹痛、腹胀、里急后重、形寒肢冷、腹泻、黏液便及神疲乏力等症状显著，改善UC患者精神情志（抑郁、焦虑）的障碍，提高UC患者的生活质量；艾灸治疗UC有效，可能与激活VDR活性，继而降低了肠道抗菌肽REG IV和Cyp27b1的表达，减少了促炎细胞因子IL12/23 p40的释放有关。综上所述，VDR信号通路异常与UC发病密切相关，艾灸能调节UC患者结肠组织VDR的蛋白活性，继而影响肠道抗菌肽REG IV的表达，减轻局部炎症；艾灸参与DSS诱导的UC模型结肠组织免疫调节，调控肠黏膜屏障蛋白的表达，继而达到保护肠黏膜，减轻结肠炎症损伤的作用。