新型TrxR抑制剂协同TRAIL诱导乳腺癌细胞凋亡的机制研究

乳腺癌发病率高居我国女性恶性肿瘤首位，寻求有效治疗方法具有重要意义。肿瘤坏死因子TRAIL能特异性地诱导多种肿瘤细胞凋亡，是最有前途的抗癌药物之一。而大多数乳腺癌细胞对TRAIL耐受，成为其临床应用的瓶颈与难点。.本课题提出硫氧还蛋白还原酶（TrxR）抑制剂协同TRAIL治疗乳腺癌这一设想。以新型TrxR抑制剂碲桥联环糊精（2-TeCD）做为辅助药物，靶向TRAIL耐受型乳腺癌细胞，检测2-TeCD与TRAIL联用后细胞凋亡指标的变化。依据TrxR抑制剂促进ASK1激活、抑制NFκB转录的特性，运用现代分子生物学技术，探索ASK1/MKK4/JNK及IKK/IκBα/NFκB信号通路是否在药物协同诱导细胞凋亡中发挥关键作用。最后，建立裸鼠皮下移植瘤模型，结合肿瘤病理学、组织学分析，验证协同用药的体内抗肿瘤效应及机制。.本项目将通过研究药物抗癌作用及机理，为临床治疗联合用药方案提供新思路。

结题摘要：. 针对多数乳腺癌细胞对 TRAIL产生的不同程度的耐受情况，以新型TrxR抑制剂碲桥联环糊精（2-TeCD），硒化桥联环糊精（2-SeCD）做为辅助药物，靶向TRAIL耐受型乳腺癌细胞，检测了2-TeCD与TRAIL联用后细胞凋亡指标Caspase激酶蛋白家族的变化情况。最后证实了TrxR抑制剂能够通过促进ASK1激活、抑制NFκB转录从而协同TRAIL在乳腺癌体外以及裸鼠体内移植瘤中发挥重要作用。此外，申请人拓展了本项目的研究工作，利用学科交叉优势，创新性的探索了磁场与TRAIL协同作用乳腺癌细胞的相关机理，对比了与化学药物协同诱导凋亡的机理差异。本项目已通过研究药物抗癌作用及机理，为临床治疗联合用药方案提供了新的思路。. 具体的研究内容包括：. （1）2-TeCD/2-SeCD与TRAIL协同作用诱导乳腺癌细胞凋亡作用的机理研究.分析并证实了TrxR抑制剂与TRAIL协同诱导乳腺癌各细胞系凋亡的效应及其时间剂量关系。观察药物了对细胞凋亡重要指标包括Caspase家族的上调表达作用。借助了基因过表达，RNA干扰及分子抑制剂处理等手段，着重研究和考察ASK1/MKK/JNK以及IKK/IκBα/NFκB信号通路相关蛋白在TrxR抑制剂介导细胞凋亡中发挥的作用。.（2） 建立裸鼠乳腺癌皮下移植瘤模型,充分论证了TrxR抑制剂做为 TRAIL 敏化药物的可行性 .在体外实验的基础上,通过建立 MDA-MB-468 乳腺癌荷瘤裸鼠模型,验证了TrxR抑制剂与 TRAIL 联合应用治疗乳腺癌的药学效应。实验数据证实，药物联用可以显著抑制裸鼠体内肿瘤生长,并提高荷瘤鼠的生存质量。免疫组织化学染色结果显示,药物联合治疗组中细胞增殖抗原标记物 PCNA及 Ki-67 的表达含量减少,同时细胞凋亡标记物 TUNEL的表达含量明显增多。.（3）静磁场与TRAIL协同诱导乳腺癌的机制研究. 制作了增强型Helmholtz i装置，产生了3.0 mT的稳恒静磁场。证实了该磁场能够协同TRAIL作用耐受性乳腺癌细胞，并诱导细胞凋亡。机理研究指出了其与化学协同诱导的差异。即，磁场通过细胞周期蛋白敏化相关凋亡通路而实现。