负性协同刺激分子B7-H1在胃癌组织中表达的调节机制研究

研究发现B7-H1的mRNA广泛表达于多种非淋巴组织，而其蛋白在正常组织中表达限于免疫细胞，提示B7-H1的表达属于转录后调控过程。近期基因调控机制研究结果提示B7-H1蛋白在肿瘤组织中表达可能受其3'-UTR内SNP与miRNA共同调节。鉴此，本项目以SNP和miRNA为切入点，选择胃癌为研究对象，首先拟采用生物信息学方法筛选出候选SNP和候选miRNA；然后采用ASA法、免疫组化法和实时RT-PCR法分别测定候选SNP类型、B7-H1蛋白表达和miRNA表达量，比较它们在病例组和对照组中的差异，并结合临床和病理资料统计分析其与胃癌的临床相关性；最后采用荧光素酶报告分析系统深入研究这些SNP和miRNA在B7-H1蛋白表达中的调节机制，及其在胃癌发生发展过程中的作用机制，为最终阐明遗传变异影响胃癌免疫逃逸的分子机理和研发以B7-H1为靶标的治疗途径奠定基础，具有理论创新性和潜在运用价值。

研究发现，负性协同刺激分子B7-H1 的mRNA 广泛表达于多种非淋巴组织，而其蛋白在正常组织中表达限于免疫细胞，提示B7-H1 的表达属于转录后调控过程。近期基因调控机制研究结果提示，B7-H1 蛋白在肿瘤组织中表达可能受其3'-UTR 内SNP 与miRNA 共同调节。鉴此，我们首先采用生物信息学方法筛选出候选SNP和miRNA；然后采用测序法、免疫组化法、实时荧光定量PCR 法分别测定B7-H1基因3'-UTR 内SNP基因型、B7-H1蛋白表达和miRNA 表达量，比较它们在病例组和对照组中的差异，并统计分析其与胃癌的临床相关性；最后采用荧光素酶报告分析系统深入研究这些SNP 和miRNA在B7-H1 蛋白表达中的调节机制，及其在胃癌发生发展过程中的作用机制。.DNA测序分析发现，胃癌（128/205）、食管癌（17/24）、肠癌（6/16）、肝癌（7/19）和胰腺癌（6/12）组织，以及肿瘤细胞株（2/12）中B7-H1基因3′-UTR发生了一个G>C点突变，位于microRNA miR-570结合靶点的“关键区域（seed region）”内。体外功能实验证实，该突变影响了miR-570对B7-H1蛋白表达的调控，导致B7-H1蛋白在癌组织中异常表达；进一步统计分析发现，该突变的发生与胃癌细胞分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移和TNM分期等临床病理参数显著相关（p<0.001），且与患者年龄、吸烟和饮酒等危险因素也显著相关，从而介导了胃癌的免疫逃逸，在胃癌的发生发展过程中起着极其重要的作用。.随后，我们测定了205例胃癌患者及393例正常健康人外周血中B7-H1基因3′-UTR上的SNP基因型，发现rs4143815（C>G）位点在胃癌患者与正常健康人群中的基因型分布存在显著差异 （p=1.32×10-8）。与CC纯合子相比，GG纯合子和G等位基因携带者患胃癌的风险分别是健康对照组的3.73倍（p=2.98×10-8）和1.85倍（p=0.002）。进一步统计分析发现，这些基因型与肿瘤发生位置、细胞分化程度、肿瘤浸润深度和TNM分期等临床病理参数显著相关（p<0.001）。.这些发现不仅对阐明B7-H1蛋白在胃癌组织中表达的调节机制有理论意义，还为最终阐明遗传变异影响胃癌免疫逃逸的分子机理和设计以B7-H1为靶标的治疗途径奠定了基础，具有潜在的应用价值。