负性协同刺激分子B7-H4在肾癌细胞中的表达调控及逆向信号作用机制

B7-H4是B7家族最新发现的负性协同刺激分子，业已发现肾癌B7-H4的表达与肿瘤的发生发展具有相关性，肿瘤相关巨噬细胞表达的B7-H4参与肿瘤的免疫逃逸，但肿瘤细胞表达的B7-H4的确切生物学意义尚待进一步研究。本项目针对这一科学问题，结合前期研究基础，拟通过反义核酸技术，研究肾癌细胞OS-RC-2中B7-H4的表达调控及相关调控元件，B7-H4的逆向信号对于肿瘤细胞的分化、抗凋亡作用、趋化作用和迁移能力的影响及相关分子机制，通过SCID小鼠体内成瘤实验研究B7-H4的表达对肿瘤细胞的成瘤能力和趋化作用的影响，并利用蛋白质组学技术分析瘤组织筛选差异表达的分子，免疫共沉淀研究B7-H4在细胞内的接头分子及其信号通路，揭示B7-H4在肾癌细胞中表达的生物学意义，为肾癌的免疫逃逸提供新的分子机制，和肾癌的免疫干预开拓新思路。

本团队在研究中，发现B7-H4分子在某些肿瘤细胞中并没有定位于细胞膜，而是表达于细胞内，并且该实验现象与文献报道一致。项目负责人结合文献报道和实验现象，灵活运用生物信息学手段，发现B7-H4分子不仅含有信号肽序列，而且含有核定位序列，突破了此前关于B7-H4分子的定论，认为B7-H4分子不仅是一膜蛋白，而且也是一核定位蛋白，简言之，是一双定位蛋白。随后通过构建B7-H4野生型与核定位序列突变体的转基因细胞，发现B7-H4野生型分子具有促进细胞增殖的作用，但是核定位序列突变体却无此作用，说明B7-H4在肿瘤细胞中传递的逆向信号依赖于其核定位序列,与其核转移密切相关，提示该分子有可能转位进细胞核调控相关基因的表达。此研究结果在负性共刺激分子家族的研究中具有突破性的意义,此前B7家族成员从未发现具有核定位序列，虽发现有些B7分子具有传递逆向信号的功能，但由于这些分子一向被认为是膜蛋白，而且胞内部分氨基酸序列都非常短，因此关于其逆向信号传递的确切机制研究一直未有进展，本研究在某种程度上解释了B7家族分子传递逆向信号的确切机制，具有重大科学理论基础意义。