基于长时程增强效应升降散干预神经病理性疼痛中枢敏化的机制研究

Neuropathic pain ( NP ) have high prevalence rate, to the patient's daily life brought great suffering. The present study suggest that the formation mechanism is mainly because of the central sensitization to spinal LTP as the core, The clinical curative effect of Western medicine is not ideal. Shengjiang Powder have the effect of poking and eliminating stagnation,and have good effect in the treatment of NP. It In accordance with the Chinese medicine treatment concept of "no block no pain". modern research suggests Shengjiang Powder has anti-inflammatory, anti-platelet aggregation, inhibition of excitatory neural anticonvulsive effect, but its mechanism study on the treatment of NP little. For pain, Western medicine consider "Pain is pass,no pass no pain", these two ideas are contradictory? Or different expressions of two theoretical systems? Therefore, the project combines the hint of previous research results, adopt the animal experiment of peripheral nerve injury NP model, by observing the effect of Shengjiang Powder on the injury side C fiber evoked spinal dorsal horn of spinal cord LTP potential, and its influence on the gene and protein expression of inflammatory mediators of TNF- α, IL-6, P-38 MAPK, its influence on the expression of P2Y12 receptor,and its moderating effect on the excitatory neurotransmitter NMDA and its receptor and the inhibitory neurotransmitter GABA and its receptor, investigate Shengjiang Powder Treatment Mechanism of NP, explains the mechanism of "no block no pain"

神经病理性疼痛（NP）患病率高。目前认为其形成机制主要是以脊髓长时程增强（LTP）效应为核心的中枢敏化，西药临床疗效不理想。具有通郁散结功效的升降散治疗NP疗效较好，符合中医"通则不痛"的治疗理念，现代研究提示升降散有抗炎、抗血小板聚集、抑制神经兴奋性抗惊厥等作用，但其治疗NP的机制研究甚少。对于疼痛，西医却认为"痛则通，不通则不痛"，这两种理念是相互矛盾？还是两种理论体系的不同表述？为此，本项目结合既往有关升降散药理药效学研究结果的提示，采取周围神经损伤性NP动物模型，通过观察升降散对损伤侧C纤维诱发脊髓背角LTP电位的影响，以及对脊髓炎性介质TNF-α、IL-6、P-38MAPK基因及蛋白表达的影响，对在血小板聚集和NP形成过程中均起作用的P2Y12受体的影响，对兴奋性神经递质NMDA及其受体和抑制性神经递质GABA及其受体的调节作用，探讨升降散治疗NP的机制，阐释"通则不痛"的机理。

具有高患病率的神经病理性疼痛（NP），目前认为主要形成机制是以脊髓长时程增强（LTP）效应为核心的中枢敏化，且西药治疗存在一定局限性。具有通郁散结功效的升降散治疗NP临床疗效较好，符合中医“通则不痛”的治疗理念，现代研究提示升降散有抗炎、抗血小板聚集、抑制神经兴奋性抗惊厥等作用，但其治疗NP的机制研究甚少。本研究通过动物实验探究升降散干预后不同组别大鼠行为学改变情况，运用Western blot、ELISA以及q-PCR法检测大鼠脊髓背角P2Y12、P-38 MAPK信号通路及其下游细胞因子的影响，以及对不同类型神经递质及其受体的调节作用。为了进一步探索升降散中的有效单体成分，我们运用iTRQA技术对中药单体大黄素对NP的干预效果和作用机制进行探究。结果显示升降散能够改善iCCI大鼠的自发性疼痛、痛觉过敏以及异常性疼痛表现。造模后大鼠脊髓组织中p38及其磷酸化水平、IL-6、TNF-α、P2Y12的水平急剧上升，升降散治疗后能够抑制p38及其磷酸化水平表达，并显著降低脊髓中TNF-α、IL-6及其mRNA的表达。升降散治疗随升降散剂量的升高P2Y12受体mRNA的表达水平呈下降趋势。与正常组相比，模型组大鼠p-NMDAR水平明显升高，GABAR mRNA表达水平明显下降；经给药处理，高剂量组抑制了p-NMDAR水平升高和GABAR mRNA表达水平下降，且与模型组存在显著差异。iTRAQ技术检测结果最终提示大黄素的作用靶点可能与MGL、MAO、H2A、MBP、MPZ蛋白表达，以及PLCβ-PKC等通路有关。最终我们得出以下结论：1.升降散高剂量组对NP大鼠具有一定的镇痛作用，通过对TNF-α、IL-6、P-38 MAPK等炎症介质信号通路的抑制作用。2.虽然由于仪器调试不理想，放弃了脊髓背角C纤维诱发LTP电位的相关检测，但研究中发现升降散主方可以通过降低NMDAR的磷酸化水平及提高GABAR mRNA表达水平，即通过对神经兴奋性相关因素其受体的调节作用，间接抑制长时程增强（LTP） 效应，侧降低中枢敏感性。3.升降散中的单体成分大黄素，发现其具有一定的镇痛作用，结合iTRAQ技术筛选出了其可能的作用靶点，为进一步研究打下基础。