古方青娥丸加味介导脂联素和1,25-（OH）2D3-VDR mRNA促血管化骨新生治疗INFH的机制

The bone repairment and angiogenesis were the key for treating ischemic necrosis of the femoral head (INFH). Our recent studies have shown the level of adiponectin was one of the potential biomarker for diagnosing the early stagy of INFH. Our research group was long-term commitment to the study of INFH. We have conclued that it was effective to prevent and treat early stage of INFH using ancient Qinge pill plus Salvia under the the guidance of traditional Chinese theory of “essence in kidney, marrow comes from essence and bone comes from marrow” , but the mechanisim was not yet fully elucidated. Our recent studies have shown that the pill can increase serum levels of adiponectin and 1,25-(OH)2 D3. It was reported that adiponectin was closely related with lipid metabolism, angiogenesis, and bone metabolism, and 1,25-(OH)2 D3 could promote vascular endothelial cells and osteoblast-like cells differentiation into blood vessels and ossification by cells mutual information transmission system. So we expect to detect the relationship in the signaling pathway of adiponectin, expression of 1,25-（OH）2D3 and its receptor, and local bone repair and angiogenesis in the INFH by the moleclular biology, immunohistochemistry, micro-CT, and confocal methods. And to detect the above indicators interfered by Qinge pill. Then to clarify the pathogenesis of INFH and mechanism of Qinge pill. It has great theoratical value and clinical significance in this study.

股骨头缺血性坏死（INFH）保髋治疗关键在骨修复和血管新生。我们既往研究表明脂联素水平可作为早期诊断INFH 潜在的生物学标志物之一。本课题组在“肾藏精，精生髓，髓生骨”等理论指导下，运用古方青娥丸加丹参防治INFH疗效显著，但机理尚未完全阐明。我们近期小样本临床研究显示该方能够提高患者脂联素及1,25-(OH)2 D3的含量。理论上脂联素参与INFH发病密切相关的脂质代谢、血管新生及骨代谢的过程，1,25-(OH)2 D3可通过血管内皮细胞与成骨样细胞间的相互信息传递系统促进血管化和骨化。因此，我们选择脂联素及1，25-(OH)2 D3作为治疗INFH的中间交汇点及调控靶点，探讨脂联素信号通路和1,25-(OH)2 D3-VDR mRNA表达水平与INFH局部骨修复和血管新生的关系，同时研究古方对上述指标的影响，以期进一步阐明INFH发病机理和古方作用机制，具有重大的理论价值和临床意义。

背景：依据中医理论，非创伤性股骨头坏死（ ONFH） 多归因于肾虚血瘀。课题组前期临床运用补肾活血方青娥加味（QEF）治疗早期 ONFH 疗效确切，但其作用机理不明。近期我们的研究结果表明QEF可有效防治ONFH，该病患者血浆脂联素及1,25-(OH)2 D3-VDR水平下降。其具体机制是否是通过其调控体内脂联素及1,25-(OH)2 D3-VDRmRNA信号通路，进而发挥促进局部血管新生及坏死区骨组织的修复有关有待进一步证实。主要内容：因此本项目运用细胞培养，结合小动物及临床实验，并采用Micro-CT检测，结合RT-PCR技术，流式细胞技术，酶联免疫及荧光组化技术等检测了ONFH循环血及骨组织局部1,25-(OH)2 D3-VDR mRNA、脂联素及其受体等的表达水平及其在改善微循环障碍，促炎症反应，介导氧化应激反应及调节骨代谢等方面的作用。重要结果：体外实验证实QEF含药血清通过增强rhBMP2活性及TGF-β1 mRNA的表达在股骨近端骨的修复中起关键作用。在动物实验中应用Micro-CT获得股骨松质骨微结构的三维参数，并证实QEF能明显改善骨小梁结构，疗效与雌激素类似，且证实了QEF能有效调控体内脂联素、1,25-(OH)2 D3-VDR mRNA信号转导通路对ONFH起修复作用。临床实验研究证实：QEF可有效的改善患者脂质代谢水平、部分血黏度相关指标、TNF-α及骨转换标志物β-CTX、 N-MID、T-PINP、SOST等相关因子水平，抑制局部炎症反应，改善局部微循环及骨转换，缓解骨髓水肿及临床症状，提高患者生活质量，这种作用可能是通过调控脂联素信号通路及VDR mRNA水平完成的。科学意义：本研究以早期ONFH 为对象，按照补肾活血法治疗原则，应用QEF治疗本病而取效，系我们研究组的优势和创新。且阐明了ONFH 的部分发病机理和治疗靶点，为本方的临床使用提供坚实的实验依据，且有利于发展中医药治疗“骨蚀、骨萎”的理论和实践。且创新性地初步探讨了1,25-(OH)2 D3相关的局部RAS系统在本病发病机理及QEF治疗中的作用，为下一步更深入的研究奠定了基础。