尾加压素Ⅱ在糖尿病肾病肾脏纤维化中的作用及新机制研究-经由内质网应激途径

Pathogenesis of diabetic nephropathy are unclear.According to literatures and our previous studies, we presumed that urotensin Ⅱ(UⅡ) is a new pathological factor which can trigger renal fibrosis via ER Stress in renal tubular epithelium in dabetic nephropathy. In this program, we will detect the expression of markers of epithelial mesenchymal transition (EMT ) such as α-SMA and FSP1 , expression of markers of endoplasmic reticulum stress (ER-Stress)such as GRP78 and CHOP after renal tubular epithelial cell exposed to UⅡ and ER-stress inhibitors; then, we will verify whether involved IRE1α、PERK、ATF6、through small interference RNA (siRNA) transfect methods;at last, we will study whether renal fibrosis and ER-stress inhibited after we interfere the action of UⅡ such as or using of diabetic nephropathy mice with UT receptor knocked out. Through our studies, we can verify UⅡ induce renal fibrosis via ER Stress in renal tubular epithelium which is a new mechanism of renal fibrosis. This study provide us some new target sites of treatment for diabetic nephropahty.

糖尿病肾病（ＤＮ）的发病机制尚不完全明确。根据我们以往的研究提出假想：尾加压素Ⅱ(UⅡ)是新的致肾脏纤维化因子，机制可能是经肾小管上皮内质网应激（ER-Stress）途径。本研究拟通过加入UⅡ及加入ER-Stress抑制剂，观察UII对肾小管上皮间充质转化（EMT）标志物α-SMA和FSP1的表达，GRP78和CHOP的表达的影响；通过小干扰RNA基因转染的方法，明确涉及IRE1α、PERK、ATF6、信号通路;应用UT受体基因敲除的DN小鼠模型，观察肾脏纤维化和肾小管上皮ER-Stress是否受抑制。通过本研究证实UⅡ介导DN肾脏纤维化的新机制，经由肾小管上皮ER-Stress途径。本研究为DN治疗提供新的靶点。

糖尿病肾病是糖尿病常见和重要的并发症，尽管在糖尿病肾病患者中严格控制血糖、血脂和血压，却仍有相当多的患者不断进展进入终末肾衰竭。鉴于目前的治疗手段仍不能有效控制糖尿病肾病的进展，表明对此疾病的认识还需要继续深入，认识新的致病因素和发病机制至关重要。. 我们根据以往的研究提出假想：尾加压素Ⅱ(UⅡ)是新的致糖尿病肾病肾脏纤维化因子，机制可能是经诱发肾小管上皮内质网应激（ER-Stress）途径。我们通过体外细胞培养及整体动物实验研究（1)UⅡ是否介导肾小管上皮间充质转换（epithelial-mesenchymal transition，EMT)，并与肾脏纤维化有关（2）UⅡ介导的人肾小管上皮EMT 是否经由肾小管上皮ER-Stress途径, 加用ER-Stress 阻滞剂4PBA，是否阻止UⅡ介导的肾小管上皮细胞EMT标志物上调。 . 我们的结果首次发现：UⅡ能显著增加体外培养的人肾小管上皮细胞（HK2细胞）表达内质网应激标志物GRP78 和CHOP，给予UⅡ刺激后，肾小管上皮细胞呈成纤维细胞典型形态，EMT的标志物ALPHA-SMA、FSP1 的mRNA和蛋白显著上调，加入UⅡ和内质网应激阻滞剂4PBA刺激HK2细胞12h-24h，可显著抑制ALPHA-SMA、FSP1、CHOP、GRP78的表达。C57BL6小鼠通过腹腔注射链脲佐菌素成功制作糖尿病模型,结果显示：18周后糖尿病小鼠其肾脏病理检查PAS,PASM,Masson染色显示：肾小球系膜基质明显增宽，免疫组化显示UⅡ及UⅡ受体，ALPHA-SMA, FSP-1表达，IV胶原，纤粘连蛋白表达显著上调，主要在肾小管上皮细胞表达。Real time PCR 结果显示UⅡ及UⅡ受体，GRP78 和CHOP，ALPHA-SMA,FSP-1,IV胶原及纤粘连蛋白mRNA显著上调，western blot结果显示：UⅡ、ALPHA-SMA蛋白表达显著上调。. 我们的结果从体内外证实, UⅡ介导糖尿病肾病肾脏纤维化的新机制是经诱发肾小管上皮内质网应激途径,为今后糖尿病肾病治疗提供了新的干预靶点及治疗途径。. 通过本项目资助,我们发表标注SCI论著1篇,另1篇已接收, 培养毕业1名博士生,1名硕士生.