小麦赤霉菌致病相关基因的克隆及其功能鉴定

本研究旨在克隆小麦赤霉菌（Fusarium graminearum Schwabe）致病相关基因，利用基因敲除技术鉴定其功能，从而为揭示小麦赤霉菌致病机理的研究奠定基础。.采用REMI技术对小麦赤霉菌进行随机诱变。建立由具有标签的，随机位点突变的转化子组成的REMI突变库。通过毒性鉴定，获得毒性减弱或丧失的毒性突变株。利用"质粒获救法"或"TAIL-PCR"得到标签插入位点的侧翼序列。以侧翼序列制备探针，从小麦赤霉菌粘粒基因组文库中筛查发生突变的目标基因，此即候选的致病相关基因。使用"一步法"或基于PCR的方法，如Split Marker方法， 构建致病相关基因敲除载体，经过转化获得敲除突变体。根据基因序列，利用分析软件进行基因功能的预测。同时对敲除突变体和REMI突变体进行形态、生理和生化测定，全面分析突变基因对应的表型变化。最终确定目标基因的功能。