小麦赤霉菌MGV1 MAPK信号级联途径基因的解析及毒性相关性研究

利用现有小麦赤霉菌基因组数据库资源，以基因敲除技术以及常用基因互作分析手段，对小麦赤霉菌MGV1 MAPK信号级联通路各基因进行鉴别和解析，旨在阐明该途径的主要成员及其互作关系，确定各成员功能尚失（loss-of-function）突变体的表型特征 。特别是以MGV1为线索，寻找其下游调控的基因，建立其与细胞壁组装或细胞壁物质合成基因之间的联系。其次，MGV1为重要的毒性关联基因，分析MGV1信号通路各成员在细胞壁整合中的生物学功能与其致毒性的关联对于了解小麦赤霉菌如何克服寄主的防御机制密切相关。

利用现有小麦赤霉菌基因组数据库资源，以基因敲除技术以及常用基因互作分析手段，对小麦赤霉菌MGV1 MAPK 信号级联通路各基因进行鉴别和解析，旨在阐明该途径的主要成员及其互作关系，确定各成员功能尚失（loss-of-function）突变体的表型特征。本研究利用Split-marker 技术成功敲除了小麦赤霉菌MGV1信号级联通路MAPK Module基因FgBCK1，Fg MKK2 和MGV1并对各缺失突变体表型特征进行了鉴定。通过构建含有Neomycin抗性基因(NeoR)且具有蓝白选择标记的质粒载体pZWH1，完成了三个基因缺失突变体的互补分析。Mkk2（T197D，T203D）双磷酸化位点的突变载体pZWH5的构建以及分别对FgBCK1，Fg MKK2 和MGV1缺失突变的互补分析表明，Mkk2在CWI信号通路中位于Bck1下游，Mgv1上游。同时，进行了小麦赤霉菌细胞壁物质合成基因GLS2的基因取代以及小麦赤霉菌MGV1及cAMP 信号通路基因的DGE测序差异表达分析，获得了分别受Mgv1，FgCPKA和FgAC1调控的候选基因。