基于1,25(OH)2D3/VDR信号网络探讨复方银屑I号调节免疫平衡、抑制角质形成细胞增殖的机制

Our prevous researches, including animal expriment and cell expreriment, have investigated that YXIHF can obviously inhibit the prolification of keratinocyte and YXIHF can adjust the banance of T lymphocyte, Furthermore, YXIHF can promote the expression of 1,25(OH)2,D3/VDR signal net. However, the mechanism of the anti-inhibitory and adjustment of YXIHF is still unknown. We speculate that there is a intimate connection between 1,25(OH)2,D3/VDR signal net and JAK/STAT signal way. Therefore, some laboratory techniques, reverse transcription-polymerase chain reaction, Western blot and enzyme-linked immuno sorbent assay, will be used to detect the variation of protein and gene of Gli1, cyclinD1 and JAK/STAT signal way, and the relationship between 1,25(OH)2,D3/VDR signal net and the balance of IL-17 and IL-23, IL-4 and IFN-γ. Thus clarify the target spot of YXIHF in the treatment of psoriasis.

银屑I号方是我校名老中医银屑病研究团队的经验方，在前期的动物试验和临床观察中已经证实：银屑I号方对银屑病的治疗有良好疗效，对角质形成细胞有明显的抑制作用，促进角质形成细胞、T淋巴细胞代谢过程中1,25(OH)2,D3/VDR信号表达，然而，该复方抗增殖及促进信号表达的靶点尚不明确，成为银屑I号方临床推广的瓶颈。对此，本课题采用RT-PCR、Western blot法、ElISA法检测银屑I号方对银屑病细胞模型、动物模型中1,25(OH)2,D3/VDR表达的影响，1,25(OH)2,D3/VDR信号网络与凋亡蛋白Gli1、cyclinD1、JAK/STAT信号通路间蛋白表达关系，IL-17/IL-23，IL-4/IFN-γ与该信号通路关系。从分子水平阐述银屑I号方治疗银屑病的作用靶点，探讨药物的代谢机制，为中药复方的现代化与推广提供更强的科研支持。

背景.银屑病作为皮肤科临床中的常见病、多发病，目前对于其发病机制仍处于探索之中。维生素D 信号途径作为银屑病发病过程中的重要环节，它可双向调节免疫应答方向，全程参与了对银屑病免疫应答、炎症反应及细胞增殖的多个环节，近年来维生素D 信号传导在银屑病发病中的作用愈来愈受到皮科学者重视。银屑Ⅰ号是国医大师禤国维基于“从血论治”理论治疗银屑病的经验方，疗效可靠，安全性高，在我科应用多年。但其如何作用于银屑病发挥治疗作用的机制尚不清楚。.目的.1.病毒转染法构建稳定VDR-/-Hacat细胞株作为后续实验基础。.2.以TNF-α诱导的Hacat细胞作为银屑病模型，探讨银屑Ⅰ号方对此银屑病细胞模型1,25(0H)2D3/VDR信号网络、JAKs/STATs信号通路的可能调控机制。.3.以银屑病患者外周血及银屑Ⅰ号含药血清建立细胞共浴模型，探讨银屑Ⅰ号方对VDR/STATs信号通路的调控作用及对T淋巴细胞分化亚型的影响。.4.以咪喹莫特诱导的BALB/c银屑病小鼠作为研究对象，探讨银屑Ⅰ号方对VDR/STATs信号通路的调控作用、对炎症因子的干预及对小鼠外周血T淋巴细胞分化亚型的影响。.重要结论.1.VDR775质粒可成功转染Hacat细胞，显著抑制VDR基因及蛋白表达水平。.2.成功构建野生型VDR-/-细胞模型，发现沉默VDR后NF-κB及STAT4信号表达均明显升高，且其下游炎症因子表达升高，提示VDR可能与NF-κB、STAT4信号之间存在“串话作用”，VDR可能通过调控NF-κB/STATs信号网络发挥抑制银屑病炎症微环境的作用。.3.银屑I号可调控细胞及动物模型中T淋巴细胞分化，改善银屑病CD4/CD8倒置的状态，使CD4/CD8比值趋向正常，且存在一定剂量依赖性。.4.银屑病小鼠模型中银屑Ⅰ号可通过调控VDR及其下游胞质受体RAR、RXR，一定程度抑制CyclinD1、Gli1细胞增殖周期蛋白素等表达，提示银屑I号抑制角质细胞异常增殖分化可能与调控VDR信号有关。.5.银屑Ⅰ号可降低细胞模型及动物模型中炎症因子的水平，且与沉默组进行组内比较发现抗炎作用减弱，且存在一定剂量依赖性，表明VDR可能是银屑I号调控NF-κB/STATs信号通路抑制炎症反应的重要靶点之一。.科学意义.本研究结果为银屑I号治疗银屑病的机制提供了一种新思路，为后续更好的产学推广奠定了一定基础。