柿果实乙醇脱氢酶基因克隆及功能鉴定的研究

乙醇脱氢酶(ADH)是植物发育过程中重要的调节酶类，在模式植物上有了详细的研究。但目前对柿果实发育中ADH酶、尤其是Adh基因的研究报道较少，未见系统研究报道。因此，本项目（1）以'西村早生'或'罗田甜柿'为试材，采用RT-PCR和RACE方法，克隆柿编码ADH酶的Adh基因cDNA全长序列，并对其在柿果实中的表达特征进行分析；（2）采用根癌农杆菌介导法将柿果实Adh-cDNA导入拟南芥植株进行超表达，进行转基因植株代谢特征分析，得到ADH活性改变条件下植株的代谢改变特征；（3）分析盐胁迫(或低氧胁迫)对转基因植株表达蛋白组分的影响。通过上述研究，了解柿果实Adh基因的基本特征及其调节功能，为深入了解柿果实发育调节，人为调节ADH酶活性正/反变化及柿树Adh基因遗传转化提供参考。研究结果不仅可以丰富柿果实发育调控方面的知识，更具有潜在的应用价值。

乙醇脱氢酶(ADH)是植物发育过程中重要的调节酶类，在模式植物上已有详细的研究。但目前对柿果实发育中ADH酶、尤其是adh基因的研究报道较少，未见系统研究报道。因此，本项目（1）克隆了柿果实adh基因的cDNA全长。以'磨盘柿'果实为试材，采用RT-PCR及RACE 技术进行全长cDNA 克隆，得到了1459bp的cDNA全长，命名为DkAdh1，并对其相关信息进行了分析。（2）分析了在不同类型果实发育过程中adh基因表达特点。发现adh基因在果实发育中期表达活跃，且adh基因表达具有组织特异性。（3）对涩柿果实采后脱涩过程中adh基因的作用进行了分析。发现高浓度CO2和1.0 ppm的1-MCP同时处理，adh相对表达量变化不显著且pdc基因（丙酮酸脱羧酶基因）相对表达量有所下降，但具有促进涩柿脱涩的良好效果，说明涩柿采后果实脱涩途径可能具有多元性，有待进一步研究。研究结果为进一步研究adh基因在柿果实中的调控作用奠定了一定基础，并发现了1-MCP处理促进涩柿果实脱涩进程的新现象。