头穴丛刺法调控脑缺血后星形胶质细胞活化对神经元保护的研究

In the past, the research on ischemic stroke was often studied from the point of view of the neurons. With the deepening research of glial cell, the limitation of the study on neuron gradually became awared of in recent years. On the basis of preliminary study ,The animal models are to be made by middle cerebral artery occlusion (MCAO) with the intraluminal filament. Springbio high-throughput protein chip method is to be used to detect the expression of astrocyte marker protein GFAP, the gap junctiongap junction related proteins,the neurons unique markers of protein NF and Nogo-A and of the JAKs-SATA signal transduction pathway proteins JAK1 and of SATA3 at different time segments.Transmission electron microscope is to be used to observe the ultrastructural changes of synapse number and structure.To explore the relative protein changes caused by glial cell activation regulated by cluster scalp acupuncture which play a protective effect on neurons after cerebral ischemia. It is expected to reveal the molecular biology mechanism of the protective effect on neurons after cerebral ischemia by cluster needing of scalp acupuncture. To provide new ideas and theoretical basis for the clinical treatment of ischemic stroke.

既往缺血性脑卒中的研究多从神经元的角度作为切入点，近年来对胶质细胞研究的不断深入，学者们逐渐意识到单纯研究神经元有一定的局限性。本项目是在前期研究工作的基础上，采用线栓法制备局灶性MCAO模型，采用Springbio高通量蛋白质芯片方法检测并筛选脑缺血后星形胶质细胞和神经元之间缝隙连接（GJ）相关特异性蛋白、Western-blot方法检测星形胶质细胞标志蛋白GFAP、神经元特有标志蛋白NF和轴突生长抑制蛋白Nogo-A、胶质细胞和神经元JAKs-SATA信号转导通路蛋白JAK1和SATA3不同时间段的表达变化，透射电镜观察突触数目及结构变化，探讨头穴丛刺法参与调控脑缺血后胶质细胞活化引起的相关蛋白质变化，从而发挥对神经元的保护作用，以期从分子水平揭示头穴丛刺法对脑缺血大鼠神经元保护的分子生物学机制，将为缺血性卒中的临床治疗提供新的思路。

既往缺血性脑卒中的研究多从神经元的角度作为切入点，近年来对胶质细胞研究的不断深入，学者们逐渐意识到单纯研究神经元有一定的局限性。本项目是在前期研究工作的基础上，提出“头穴丛刺法调控脑缺血后星形胶质细胞活化对神经元保护”的假说。实验采用线栓法制备局灶性MCAO模型，分别在造模后第1、7、14天取材，于醒后4h及取材前进行神经功能评分；观察缺血区超微结构的变化；Western-blot方法检测NF200、Nogo-A、JAK1和STAT3蛋白不同时间窗的表达；非标记蛋白组学相对定量技术及平行反应检测技术对组间显著差异蛋白点的检测及鉴定。实验研究表明：头穴丛刺法能够降低大鼠神经功能评分，促进神经功能恢复；透射电镜观察结果显示，头穴丛刺法能保护缺血半暗区神经系统结构，增加突触小泡数目，改善突触间隙的结构和功能，缓解急性脑梗死对神经系统所造成的损伤，减轻神经元受损程度，促进突触结构及功能的重建；Western-blot检测结果表明，头穴丛刺法能上调NF200、STAT3、JAK1蛋白表达、下调Nogo-A的表达，发挥脑保护作用；蛋白质组学定量结果表明，头穴丛刺法通过调控GFAP、CX43的表达，活化星形胶质细胞及缝隙连接蛋白等多种机制发挥神经保护作用；头穴丛刺法还可能通过回调另外399个蛋白点的表达发挥脑保护作用。实验结果从蛋白质角度，揭示了头穴丛刺法调控星形胶质细胞活化是治疗脑缺血重要的机制之一，为头穴丛刺法的临床应用提供了客观依据。