头穴丛刺法对脑缺血后神经血管单元重塑影响的机制研究

In the past,the research of ischemic stroke was often studied from the point of view of the neurons.Neurovascular unit emphasizes neurons, glial cells and brain microvascular endothelial cells, pericytes, and other components of the function as a whole. This project is on the basis of preliminary studies, the scalp cluster acupuncture can regulate the hypothesis of "dynamic equilibrium between the various components of the neurovascular unit". The animal models maded by the intraluminal filament of cerebral ischemia (MCAO), adopting Springbio protein chip method and Western-blot method to observe the SYN of synapses, neurons GAP-43 protein and astrocytes of GFAP, microglia CD11 and angiogenic marker protein VEGF, endothelial cells of PECAM-1, vascular endothelial cell tight junction (TJ ) of claudin-5, of occludin protein changes; confocal microscopy and electron microscopy of brain ischemia in rat astrocytes and microglia, the penumbra of the ultrastructural changes of synapse number and structure, and endothelial cell TJ .from the molecular level is expected to reveal the mechanism of the scalp cluster acupuncture on cerebral ischemia in rats neurovascular unit remodeling, to provide an objective basis for the clinical application in treating the cerebral infarction by the scalp cluster acupuncture.

以往针对缺血性脑卒中的研究多从神经元的角度入手，而神经血管单元强调神经元、胶质细胞和脑微血管内皮细胞、周细胞等组成的功能整体。本项目是在前期研究的基础上，提出头穴丛刺能够调节脑缺血后"神经血管单元各组分之间动态平衡"的假说。采用线栓法制备脑缺血(MCAO)的动物模型，通过Springbio蛋白质芯片方法和Western-blot方法观察突触SYN、神经元GAP-43蛋白和星形胶质细胞GFAP、小胶质细胞CD11及血管新生标记VEGF 、内皮细胞PECAM-1、血管内皮细胞紧密连接（TJ）Claudin-5、Occludin蛋白的变化,共聚焦显微镜和电镜观察脑缺血大鼠星形胶质细胞和小胶质细胞、半暗带突触数目和结构及内皮细胞TJ的超微结构变化，有望从分子水平揭示头穴丛刺法对脑缺血大鼠神经血管单元重塑的机制，为临床应用头穴丛刺治疗脑梗死提供客观依据。

以往针对缺血性脑卒中的研究多从神经元的角度入手，而神经血管单元强调神经元、胶质细胞和脑微血管内皮细胞、周细胞等组成的功能整体。本项目是在前期研究的基础上，提出头穴丛刺能够调节脑缺血后“神经血管单元各组分之间动态平衡”的假说。采用线拴法制备局灶性脑缺血（MCAO）动物模型，分别在造模后第1、7、14天取材，于取材前进行神经功能评分。通过Springbio蛋白质芯片方法和Western-blot方法观察突触SYN、神经元GAP-43蛋白和星形胶质细胞GFAP、小胶质细胞CD11及血管新生标记VEGF 、内皮细胞PECAM-1、血管内皮细胞紧密连接（TJ）Claudin-5、Occludin蛋白的变化；共聚焦显微镜和透射电镜观察星形胶质细胞和小胶质细胞分布的改变、半暗带突触数目和超微结构及内皮细胞TJ超微结构的改变。实验表明：头穴丛刺能够明显改善大鼠神经功能评分，改善MCAO大鼠的行为学症状，促进肢体运动功能的恢复；Springbio蛋白质芯片和Western-blot结果提示，与模型组相比，头穴丛刺组半暗带区突触SYN、神经元GAP-43蛋白与血管相关蛋白VEGF、Claudin-5、Occludin蛋白的表达水平显著提高，星形胶质细胞GFAP、小胶质细胞CD11蛋白的表达有所降低；共聚焦显微镜观察免疫荧光染色提示大鼠缺血半暗带的SYN表达与微血管密度增加显著，提示头穴丛刺可以促进突触与血管的新生；超微电镜观察显示，与模型组比较，缺血半暗带区突触间隙宽度、突触后致密物厚度均有所增加，说明头穴丛刺可以促进突触结构及功能的重建。实验结果从蛋白质水平的角度，揭示头穴丛刺法治疗脑缺血“有效性”的重要机制之一是通过影响了神经血管单元各组分之间蛋白质表达水平而实现的，体现了中医学“整体观念”和“动态平衡”的假说，为临床应用头穴丛刺法提供客观依据，对于临床脑卒中的急性期处理及后期康复都具有十分重要的意义，对促进人民健康水平也具有重要的现实意义。