基于化学发光脂质体作为放大载体的医学免疫新技术研究

本课题拟利用脂质体具较大内水腔的特点，将化学发光剂鲁米诺分子包裹入内，从而制备成鲁米诺脂质体。在化学发光医学免疫检测中，鲁米诺脂质体既能有效地解决鲁米诺标记后量子产率降低的问题，又能在乙腈破脂质体膜时瞬间释放大量鲁米诺分子,从而大幅提高分析物的检测灵敏度。本研究采用磁性微球作为分离和固定载体，以鲁米诺脂质体为创新点，采用化学发光免疫分析方法，实现肿瘤标记物癌胚抗原（CEA）的放大检测，并且结合适配体技术发展检测腺苷的高灵敏度新技术。该课题包括两个分析路径：（1）以CEA为分析物，构建高灵敏度的基于鲁米诺脂质体作为放大载体的化学发光免疫分析新技术，并将此方法拓宽至其他肿瘤标志物的检测，为发展非放射性、非酶标记的肿瘤标志物检测试剂盒奠定基础。（2）以腺苷为分析物，在核酸适配体技术基础上发展鲁米诺脂质体的化学发光免疫检测新技术，为有望在医学临床诊断及药学研究等领域中发挥重要作用。

化学发光脂质体是利用脂质体包埋大量化学发光信号物质鲁米诺分子，经生物分子结合反应后，通过检测脂质体破膜快速产生鲁米诺分子发出的化学发光响应信号，间接测定生物分子如肿瘤标记物癌胚抗原（CEA）等痕量物质浓度，这极大地增强了响应信号，提高了灵敏度，在临床诊断方面具有广阔的应用前景。本研究以磁性微球作为分离和固定载体，基于罗丹明B磺酸钠负载的荧光脂质体构建生物传感器，实现对人免疫球蛋白(hIgG)的高灵敏分析检测，最低检出质量浓度为1ng/mL(即6.25pmol/L)；构建了鲁米诺化学发光脂质体，建立并优化化学发光免疫检测反应体系，癌胚抗原CEA的测定线性范围为1～700ng/mL，检测限达0.7ng/mL，该方法为CEA的高灵敏度检测提供了新的思路；设计了一种基于磁性微球与核酸适体的夹心式化学发光适体传感器，建立了高灵敏度的可卡因分析方法，可卡因浓度在1.0×10－8～1.0×10－4mol/L 范围内，化学发光信号与可卡因浓度的对数值呈线性相关，检出限为3.2×10－9mol/L；结合适配体技术，自制磁性羧基微球作为生物小分子富集载体进行化学发光检测，用于环境及食品中如三磷酸腺苷等的检测，并采用无皂乳液聚合法制备了温敏磁性复合微球粒子，该复合粒子在交变磁场作用下的磁热性能可用于肿瘤热疗化疗；以羧基磁性微球为分离载体并固定氨基修饰的腺苷适配体，通过腺苷与生物素修饰的报告序列竞争结合适配体，建立了一种化学发光快速检测生物小分子腺苷的方法，腺苷浓度在1.0×10－9～1.0×10－4mol/L 范围内与化学发光信号强度减少量呈良好线性关系，该方法成功用于肿瘤患者实际尿样中腺苷的测定，有望用于临床诊断、药物分析等领域；基于核酸适配体的纳米金标记化学发光检测腺苷以及在此基础上发展羟胺放大纳米金化学发光的特性，极大提高了检测灵敏度，腺苷的最低检出浓度达1×10-13 mol/L,本方法实现了癌症患者尿样中腺苷的测定，为临床诊断疾病提供了有利分析数据。.本课题的研究结果在专业期刊发表了7篇学术论文，其中3篇SCI文章，4篇国内CSCD期刊。申请国家发明专利1项。培养4个研究生和4个本科生，且已经顺利毕业1名研究生和2个本科生。后续还有相关的SCI文章和申请相关专利1项。