1A6/DRIM相关蛋白AIP1结合并降解p53的机制研究

细胞核仁是核糖体发生的场所，细胞核仁蛋白的重要功能是参与核糖体RNA (rRNA)的转录和加工，核糖体功能的紊乱通常导致细胞周期的改变和肿瘤的发生。我们通过酵母双杂交实验分离得到1A6/DRIM结合蛋白AIP1,发现AIP1在细胞核仁内参与18S rRNA的加工，更重要的是AIP1的沉默导致抑癌基因产物p53的表达上调，进一步发现AIP1与p53直接结合，AIP1的表达导致p53的降解。本课题将对AIP1引起p53降解的分子机制进行深入研究，并探讨AIP1引起p53降解后对细胞增殖和细胞周期以及细胞凋亡的影响；分析AIP1在多种重要肿瘤中的表达及与患者预后的关系；探讨AIP1的上游基因及AIP1在肿瘤发生过程中被上调的分子机制。旨在阐明AIP1在肿瘤发生过程中的作用，找到一个与肿瘤发生密切相关的新的癌基因，为相关肿瘤的临床预后判断和肿瘤治疗提供科学依据。

在肿瘤发生过程中两个抑癌基因产物p53和RB起到重要的作用，本研究发现AIP1对p53的降解通过蛋白酶体但不依赖于泛素，因此AIP1不具备p53泛素连接酶的活性，AIP1降解p53的分子机制需要深入的研究。本研究还发现AIP1除了结合并降解p53蛋白以外还与另外一个重要抑癌基因产物RB蛋白结合；AIP1与RB蛋白细胞内和体外的结合通过免疫沉淀和GST-pull down实验得到了验证；AIP1与RB结合后引起后者通过蛋白酶体降解；进一步研究发现AIP1促进RB蛋白在细胞内和体外的多泛素化，提示AIP1具有RB泛素连接酶的活性。到目前为止只有MDM2是RB蛋白唯一的泛素连接酶，我们正在通过昆虫细胞系统纯化AIP1，进一步进行AIP1作为RB蛋白泛素连接酶的鉴定，本研究结果将证明AIP1是RB蛋白的第二个泛素连接酶，这将是本课题的重要研究成果。我们制备了抗AIP1的多克隆抗体和单克隆抗体，正在多种肿瘤组织中进行大规模免疫组化实验，目前发现AIP1在肺癌组织中表达升高，与肺癌患者的预后相关，我们正在进行动物模型的建立和验证，旨在最终将为肿瘤临床的诊断和/或干预提供一个非常重要的标志物。本研究还在对AIP1的转录调控进行深入研究，对AIP1的转录调控的研究将揭示AIP1在多种肿瘤中表达上调的机理。 ..