IL-10-592 SNP在HBV感染的非可控性炎症中的作用及分子机制

X protein (HBx), which is encoded by the human hepadnavirus HBV, is the leading cause for the development of hepatocellular carcinoma (HCC). Nonresolving inflammation, arises with involvement of microbial products and inadequate production of inflammation resolving cytokines, is a major driver of HBV infection. Thus, it is the effective preventive measure for HBV infection induced carcinogenesis through studing the mechanism of induced carcinogenesis by noresovling inflammation with HBV infection. IL-10, one of the inflammation resolving cytokines, is a trigger to controlling inflammation. The transcription activity of IL-10 is important to regulating the infection of HBV. The results indicated that single nucleotide polymorphism (SNP) of promoter IL-10-592 is responsible for the transcription activity of IL-10. The results of bioinformatics shown that glucocorticoid receptor (GR) was binding to promoter IL-10 and though interaction with IL-10-592. Therefore, we speculated that GR could regulate the expression of IL-10 to suppress the proinflammation of CD8+T cells. Through PCR, uciferase reporter assay, EMSA and supershift, we intend to verify the binding site of IL-10-592 SNP interacting with GR regulate the transcription of IL-10. This study will provide the molecular theory and experiment basis for treatment of nonresolving inflammation relevant to HBV infection.

HBx是HBV感染致癌的关键调节蛋白。非可控性炎症是HBV感染致癌的主要驱动器。因此，HBV感染的非可控性炎症可诱导肝细胞恶性转化。IL-10是非可控性炎症的主要抑制剂，对炎症的控制至关重要。因此，研究IL-10对控制HBV感染的非可控性炎症恶性转化具有重要意义。本课题前期实验表明IL-10在HBV感染的患者体内表达有明显差异，IL-10-592 SNP决定IL-10的转录活性。生物信息学分析显示糖皮质激素受体（GR）在IL-10-592 存在结合位点，提示GR可能与IL-10启动子结合，调控IL-10转录。因此我们推测：GR是IL-10的转录因子，IL-10-59 SNP决定IL-10转录活性。因此，本项目拟通过PCR，荧光素酶活性分析，EMSA，supershift等验证GR特异性结合IL-10-592-SNP，调控IL-10转录，为治疗HBV感染的非可控性炎症提供分子理论和实验基础。

HBx是HBV感染致癌的关键调节蛋白。非可控性炎症是HBV感染致癌的主要驱动器。因此，HBV感染的非可控性炎症可诱导肝细胞恶性转化。IL-10是非可控性炎症的主要抑制剂，对炎症的控制至关重要。因此，研究IL-10对控制HBV感染的非可控性炎症恶性转化具有重要意义。本课题前期实验表明IL-10在HBV感染的患者体内表达有明显差异，IL-10-592 SNP决定IL-10的转录活性。生物信息学分析显示糖皮质激素受体（GR）在IL-10-592 存在结合位点，提示GR可能与IL-10启动子结合，调控IL-10转录。因此，本项目收集大三阳、小三阳、HBsAb阳性，正常人病人标本，分离单个核细胞，采用ELISA试剂盒检测过量的GR是否对IL-10的表达有影响，RU486抑制GR的表达是否对IL-10的表达有影响。采用荧光素酶报告基因方法检测GR与IL-10-592是否存在结合位点，进而采用EMSA和supershift等验证GR特异性能否结合IL-10-592-SNP，调控IL-10转录，为治疗HBV感染的非可控性炎症提供分子理论和实验基础。结果显示，当糖皮质激素浓度为7 umol/L时IL-10分泌最多，且在HBV感染的病人中IL-10分泌高于正常人和产生抗体的病人，随着RU486浓度增大，IL-10分泌减少，促炎因子 IFN-γ, IL-2, TNFα 的分泌增加。荧光素酶报告基因结果显示，实验组GR过表达质粒与IL-10野生型和IL-10突变型（IL-10基因多态性位点）均与结合作用，表明IL-10与GR的结合位点与IL-10基因多态性位点无关。因此结果表明，生物信息学预测到GR在IL-10-592 存在结合位点，但是GR可与IL-10启动子结合的部位不存在SNP位点的差异，即均可调控IL-10转录在HBV感染的非可控性炎症中的表达，与IL-10-592 SNP无关。表明GR并不是IL-10-592 SNP特异性表达调控位点，GR位点可调控 IL-10 的表达，拮抗促炎因子 IFNγ, IL-2, TNFα 的过度分泌，决定非可控性炎症的发生和发展。