基于miRNA-21探讨药对益智仁-乌药影响PTEN/PI3K信号通路治疗糖尿病肾病的作用机制

Early prevention and treatment measures are very inportant for diabetic nephropathy (DN). Formulars mainly composed of Yizhi Ren and Wuyao are widely used to treat kindey yang deficiency DN though the mechanism remains unknown.In the occurrence and progression of early kindney yang difiency DN, mesangial cell proliferation is one of the main pathological changes, PTEN/PI3K is the key signaling pathway, while miR-21 target genes PTEN gene is a critical node of the PI3K signaling pathway.This study aims to explore the mechanism of Yizhi Ren and Wuyao treating early kindney yang difiency DN. MiR-21 plasmid were constructed and then transfected into high-sugar mesangial cells and animal model. After administration of Yizhi Ren and Wuyao, miR-21 expression level was determined by real-timePCR according to the observation of PTEN/PI3K signaling pathway; expression levels of proteins PTEN, p-Akt and PI3K p85α which are major molecules of PTEN/PI3K signaling pathway were detected by Western blot and immune cells methods. By this way, we discussed how Tonify kidney yang therapeutic principle works on kidney yang deficiency DN, and provides theoretic evidence for this therapy; it also promotes further related study.

糖尿病肾病的早期防治非常重要，临床上以益智仁乌药为主的方剂在肾阳虚型DN早期的多尿期有广泛应用，但机制尚不明确。肾小球系膜细胞增殖是肾阳虚型DN的早期病理改变之一，PTEN/PI3K 在糖尿病肾病的发生发展中是一个关键的信号传导通路。miR-21 的靶基因PTEN 基因是 PI3K信号途径中的一个重要节点。本研究通过构建miR-21质粒，转染到高糖的肾小球系膜细胞及模型动物体内，给益智仁乌药后，以PTEN/PI3K信号通路为切入点，用real-timePCR观察miR-21的表达；Western blot、免疫细胞组化检测PTEN/PI3K信号途径关键分子PTEN、p-Akt和 PI3K p85α的蛋白质表达水平，研究药对益智仁乌药（温补肾阳法）干预肾阳虚型（证）糖尿病肾病（病）的机制，为药对益智仁乌药临床治疗DN提供理论依据，同时丰富以miR-21为切入点的中医药治疗DN的机制研究。

项目的背景、主要研究内容：糖尿病肾病的早期防治非常重要，临床上以益智仁乌药为主的方剂在肾阳虚型 DN 早期的多尿期有广泛应用，但机制尚不明确。肾小球系膜细胞增殖是肾阳虚型 DN 的早期病理改变之一，PTEN/PI3K 在糖尿病肾病的发生发展中是一个关键的信号传导通路。miR-21 的靶基因 PTEN 基因是 PI3K 信号途径中的一个重要节点。本研究通过构建 miR-21 质粒，转染到高糖的肾小球系膜细胞及模型动物体内，给益智仁乌药后，以 PTEN/PI3K 信号通路为切入点，用 real-timePCR 观察 miR-21 的表达；Western blot、免疫细胞组化检测 PTEN/PI3K 信号途径关键分子 PTEN、p-Akt 和 PI3K p85α 的蛋白质表达水平，研究药对益智仁乌药（温补肾阳法）干预肾阳虚型（证）糖尿病肾病（病）的机制。.重要结果、关键数据：1、发现“益智 － 乌药”石油醚部位组的Scr、BUN 显著低于模型对照组( P＜0.05) ，其显示出良好的保护肾脏作用，因此石油醚部位是益智-乌药药对的抗糖尿病肾病的有效部位。.2、在DB/DB小鼠vs db-/db-小鼠组发现了17种不同的miRNA表达，而在db-/db-小鼠vs db-/db- AOS小鼠组中鉴定出13种不同的miRNAs表达。其中多数miRNA已被报道涉及肾功能衰竭或T2DM。 2个miRNA在db-/db-小鼠中被抑制，并通过益智仁提取物（AOE）处理后上调，而5个miRNA在db-/db-小鼠中表达，在 AOE处理后下调。 这7种确定的miRNA可能涉及到多条通路，包括T2DM、肾细胞癌、AMPK信号通路和PI3K-Akt信号通路。.3、“益智 － 乌药”醚提取物20g/kg组可使DN小鼠的肾小球 P27kip1基因和蛋白表达水平明显下降。.4、确定了DB /DB小鼠和益智仁提取物（AOE）处理的db- / db小鼠肝脏中的7个miRNA与db- / db-H2O小鼠组相比差异表达。大部分miRNAs在以前这项研究中鉴定与在肥胖或糖尿病有关。在里面2个被鉴定的miRNA（miR-598和miR-423），其表达被抑制db- / db-H2O小鼠，但通过AOE处理后恢复。.科学意义：为药对益智仁乌药临床治疗 DN 提供理论依据，同时丰富以 miR-21 为切入点的中医药