EB病毒感染调控长链非编码RNA H19参与胃癌和鼻咽癌发生发展的研究

The oncogenic mechanism of Epstein-Barr virus (EBV) remains unclear. Our preliminary data demonstrated that the H19 long noncoding RNA, an imprinted gene, may be EBV-driven suppressed gene in EBV-positive gastric carcinoma (GC) and nasopharyngeal carcinoma (NPC) cell lines. To investigate the regulatory mechanism of EBV on expression of H19 in the EBV-positive GC and NPC, the CpG methylation in the promoter and the imprinting control region 1 of H19, the imprinting status and expression of H19 in EBV-positive and -negative GC tissues and their matched adjacent normal gastric tissues, as well as in NPC tissues and nasopharyngeal tissues from non-tumor patients, will be evaluated and their interplay and clinical associations will be investigated. The regulatory factors associated with the epigenetic silences of H19 expression will be detected in EBV-negative GC and NPC cell lines with overexpression of EBV-encoded latent genes (LMP1, LMP2A, EBERs or EBNA1) and in EBV-positive GC and NPC cell lines with knocking-down LMP1, LMP2A, EBERs or EBNA1. To elucidate the molecular functions and the regulatory mechanisms of H19 in the development and progression of EBV-positive GC and NPC, the gain and loss of gene function assay will be conducted by in vitro and in vivo gene transfection studies. The results from this study will provide theoretic and experimental evidence to better understand the carcinogenesis mechanisms of EBV in the development of EBV-associated tumors, and may help to identify new molecular markers for occurrence, metastasis and prognosis of EBV-positive GC and NPC.

EB病毒致癌作用主要通过影响受感染细胞的基因表达及相应的生物学行为而实现，但其致癌机制尚未完全明了。我们前期研究发现在EBV阳性胃癌和鼻咽癌细胞系中长链非编码RNA H19可能是EBV作用的靶基因。本研究拟比较EBV阳性和阴性胃癌组织及相应癌旁组织、NPC和鼻咽部良性粘膜病变组织中H19基因启动子和印记控制区甲基化、印记状态及表达的异同，分析彼此间相互关系以及与肿瘤各临床指标的相关性；观察EBV编码基因对H19基因表达表观遗传调控因素的影响，旨在明确EBV调控H19基因表达的机制和临床意义。为阐明EBV参与相关肿瘤发生发展的机制，寻找EBV相关胃癌和鼻咽癌的特异分子标志物提供理论和实验依据。

EB病毒致癌作用机制复杂，主要通过影响受感染细胞的基因表达及相应的生物学行为而实现，但其与长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)相互作用的研究鲜有报道。本研究比较了EBV阳性和阴性胃癌细胞系以及EBVaGC和EBVnGC组织中lncRNA H19基因启动子甲基化、印记状态及表达的异同及相互关系，分析了EBV阳性NPC和阴性NPC以及EBV阳性淋巴瘤和EBV阴性淋巴瘤组织中H19印记状态。研究结果显示：①EBV可通过调控H19的表达参与EBV相关肿瘤的发生与发展，其启动子区甲基化程度与H19的表达水平密切相关，EBV编码基因可导致EBV阳性胃癌细胞中甲基化转移酶DNMT3a表达异常，引起H19基因的高甲基化和异常表达，是调控H19表达的重要因素。胃癌组织中存在一定比例的H19印记丢失，这可能是EBVnGC组织中H19表达水平增高的原因之一，EBV感染对胃癌组织中H19的印记丢失没有明显影响。②同时成功构建了EBV编码基因LMP1、LMP2A 和EBER 过表达及表达沉默的多种细胞克隆，实验结果初步显示，LMP2A 和EBER 表达及表达沉默对H19编码基因的表达无明显影响，LMP1过表达可导致H19表达水平显著降低，提示LMP1参与调控EBVaGC中H19的表达。③本研究还对H19相关信号通路进行了初步研究，发现EBV可通过H19对miRNA-874的海绵效应影响AQP3的表达，进一步影响肿瘤细胞的增殖和转移，这为深入探讨 EBV 诱导宿主基因表达异常在 EBV 相关肿瘤发生发展中的作用提供了新的思路。. 总之，本研究有助于明确EBV调控H19基因表达的机制和临床意义，对进一步阐明EBV参与相关肿瘤发生发展的机制以及寻找EBV相关肿瘤的特异分子标志物具有实际意义。