EB病毒相关胃癌抑癌基因甲基化异常及发生机制的研究

EB病毒相关胃癌(EBVaGC)与EBV感染密切相关,具有独特的临床病理特征。研究证实EBVaGC组织中存在某些肿瘤相关基因特别是抑癌基因的高甲基化，EBV诱导宿主细胞基因甲基化导致抑癌基因失活可能是EBVaGC发生的重要机制，但EBV如何诱导宿主细胞抑癌基因发生高甲基化及作用于哪些基因尚不明了。本研究采用去甲基化试剂处理EBV阳性和EBV阴性胃癌细胞系，通过比较筛选出EBV阳性细胞系中由于甲基化而沉默的抑癌基因；进而检测和比较目标基因在EBVaGC和EBVnGC组织中的甲基化状态，明确EBVaGC中由于EBV感染而诱导沉默的抑癌基因，分析目标基因甲基化与临床病理特征的关系，以确定EBVaGC特异的表观分子遗传学标记物。同时检测两种胃癌细胞系及癌组织甲基化相关蛋白的表达以及EBV阳性胃癌细胞系和癌组织中EBV基因组甲基化状态，为探讨病毒诱导甲基化以及EBV相关肿瘤的发生机制提供实验基础。

EB病毒(EBV)感染与部分胃癌的发生有关，本项目主要研究EBV参与胃癌发生的表观遗传学机制，筛选和鉴定EBV相关胃癌(EBVaGC)中由于EBV感染而沉默的抑癌基因，为深入探讨EBV诱导甲基化的机制提供实验依据。采用表达谱芯片检测分析甲基化转移酶抑制剂5-Aza-CdR处理前后EBV阳性和阴性胃癌细胞系基因表达谱，筛选出与EBV相关的候选甲基化沉默基因。选择EBV阳性、阴性细胞系及各种临床指标匹配的EBVaGC和EBV阴性胃癌(EBVnGC)组织标本，对26条候选基因进行甲基化和表达验证分析，对部分基因进行功能和调控机制的初步研究，结果表明：WNT5A、LOXL1和Rb在EBV阳性细胞及EBVaGC中呈高甲基化状态和低水平表达，是EBV诱导甲基化而沉默的特异抑癌基因；Rb启动子基因甲基化和Rb蛋白表达缺失可以作为临床判断胃癌浸润和转移的参考指标；EBVaGC组织中EBV通过诱导甲基化对促癌基因CTHRC1起负调控作用；EBV可诱导TMEM130基因的甲基化，通过甲基化抑制其表达参与EBVaGC的发生。对EBV阳性细胞系、EBVaGC和EBV阳性鼻咽癌组织中EBV核抗原启动子Wp、Cp和Qp以及潜伏膜蛋白基因LMP1和LMP2A启动子甲基化状态的检测表明，EBV通过甲基化实现自身基因在特定细胞和组织中的限制性表达。EBV阳性胃癌细胞系中DNA甲基化转移酶(DNMT)1的表达水平高于EBV阴性细胞系，EBVaGC组织中DNMT1表达率高于EBVnGC，且DNMT1表达与WNT5A、LOXL1、Rb、CTHRC1和TMEM130的甲基化存在相关关系。本研究结果表明EBV可通过诱导DNMT1表达上调，影响自身基因以及宿主基因甲基化，进而参与EBVaGC的发生，对最终阐明EBV相关肿瘤的发生机制具有重要意义。