天山花楸抗氧化及抗心肌缺血黄酮成分研究

Sorbus tianschanica Rup was a civilian medication in Uygur and Hazakh nationality of Xinjiang. The first volume of 《Xinjang Uygur Autonomous Region Pharmaceutical Standard》 has collected this medicine. According to the prophase studies, the extract of flavonoids (FTS) from Sorbus tianschanica Rup has the influence of against myocardial ischemia and anti-myocardial ischemia. In order to further identify and to rapid seperate bioactive compouns of flavonoids in FTS, we use the system of UPLC-CUPRAC-MS firstly. We use powerful separation ability of UPLC and more stable showing system of CUPRAC in order to mark the activity compounds. can against oxidation, to At the same use MS to confirm the structure of these compounds. Using the screening result to guide HSCCC to preparative isolation and purification the target compounds. Using the model of myocardial ischemia reperfusion injury to clear-out the effect of against myocardial ischemia reperfusion injury and try to investigate the probable mechanism. We want to use all of the work we did to interpret the material basis, to reveal the relationship between structure activity and flavonoids of FTS, to seek high performance bioactive medicine against myocardial ischemia.

天山花楸系新疆维吾尔族和哈萨克族民间用药，《新疆维吾尔自治区药品标准》第一册即有收载，根据申请者前期研究发现天山花楸黄酮提取物（FTS）具有依赖性地抗心肌缺血缺氧和保护心肌缺血等作用，其作用与抗氧化活性有关。为进一步明确FTS中抗心肌缺血的黄酮化合物，首先拟采用柱前衍生在线超高效液相-铜离子显色-质谱（UPLC-CUPRAC-MS）系统，利用UPLC强大的快速分离能力，更稳定的CUPRAC显色系统对抗氧化成分进行快速活性标记，同时用质谱对活性成分进行结构确认；从复杂体系中快速筛选FTS中抗氧化活性高的成分，再以筛选结果指导高效逆流色谱（HSCCC）分离制备目标黄酮化合物；同时利用心肌缺血再灌注损伤模型明确目标黄酮化合物的抗再灌损伤作用，并探讨其可能的机制；共同阐明FTS中黄酮化合物抗心肌缺血物质基础，揭示构效关系，为寻找发现活性更强的抗心肌缺血药物提供支持。

天山花楸系新疆维吾尔族和哈萨克族民间用药，研究发现天山花楸黄酮提取物（FTS）具有依赖性地抗心肌缺血缺氧和保护心肌缺血等作用，其作用与抗氧化活性有关。首先采用柱前衍生在线超高效液相-铜离子显色-质谱（UPLC-CUPRAC-MS）系统，抗氧化成分进行快速活性标记，用质谱对活性成分进行结构确认；快速筛选FTS中抗氧化活性高的成分，以筛选结果指导高效逆流色谱（HSCCC）分离制备目标黄酮化合物；同时利用心肌缺血再灌注损伤模型明确目标黄酮化合物的抗再灌损伤作用。高速逆流色谱分离得到FTS中的4种化学成分，分别是绿原酸、槲皮素-3-O-(6''-O-丙二酰基)-β-D-葡萄糖苷、紫云英苷和山奈素-3-O-(6''-O-丙二酰基)-β-D-葡萄糖苷。CUPRAC法对天山花楸黄酮提取物的最佳衍生条件，50 ℃水浴反应30 min后，450 nm处测定吸光度；HPLC-MS联用检测出天山花楸黄酮提取物与衍生试剂反应后峰面积的减少率，依次为槲皮素-3-O-(6''-O-丙二酰基)-β-D-葡萄糖苷、金丝桃苷和异槲皮苷、芦丁、山奈素-3-O-(6''-O-丙二酰基)-β-D-葡萄糖苷、紫云英苷。与缺血再灌注损伤模型组（I/R）相比，FTS高剂量组（0.15 mg/mL）、低剂量组（0.05 mg/mL）预保护后的SD大鼠离体心脏的左心室内压上升最大速率(+dp/dtmax)和最大下降速率(-dp/dtmax)、左心室发展压(LVDP)、心率（HR）和冠脉流量(CF)显著的提高；再灌后的LDH和CK含量显著性降低；SOD、Na+-K+-ATP、CAT、T-AOC酶活性，NO含量、GSH/GSSG显著升高，MDA含量显著降低； TTC染色结果表明，心肌梗死面积显著减少；HE染色结果表明，心肌水肿坏死明显减轻；TUNEL染色结果表明，心肌细胞凋亡数量明显减少；免疫组化定位检测Bcl-2蛋白表达上调，Bax蛋白表达下调；Western-Blot检测心肌细胞ERK1/2蛋白表达无显著性差异，PKC和p-ERK1/2蛋白表达显著增多。FTS中抗氧化活性强弱次序为：槲皮素-3-O-(6''-O-丙二酰基)-β-D-葡萄糖苷、金丝桃苷和异槲皮苷、芦丁、山奈素-3-O-(6''-O-丙二酰基)-β-D-葡萄糖苷、紫云英苷；其可能通过PKC-ERK1/2信号传导通路而抑制心肌细胞凋亡，发挥其保护作用。