非典型趋化因子受体CCX-CKR在人乳腺癌负性调控作用中的机制研究

乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤，转移是首要死因。积极探索乳腺癌转移机制，寻找乳腺癌防治的新靶点具有重要临床意义。课题组前期研究首次发现CCX-CKR在人乳腺癌侵袭转移中发挥负调控作用，具体机制不明。推测可能与拮抗CCR7/CCL19(CCL21)生物学轴促转移作用相关：内化清除内环境稳定性趋化因子；下调CCR7表达或减弱细胞信号传导。本项目拟沿这两条路线进行研究：1）检测移植瘤模型中易转移靶器官配基表达，观察组织提取蛋白对癌细胞趋化性差别；并研究CCX-CKR表达与微淋巴管浸润相关性；2）观察体内外环境中CCX-CKR过表达是否改变原发灶、转移灶中CCR7表达，是否降低癌细胞转移前早期事件发生；检测乳腺癌患者标本中CCX-CKR与CCR7的共表达情况，并分析其与临床特征、生存期、预后之间的关系。旨在为这一新型乳腺癌预后指标提供坚实理论依据。

在本项目研究中，我们完成了CCX-CKR表达载体构建,获得稳定高表达CCX-CKR人乳腺癌细胞系MDA-MB-231HM-CCX-CKR；成功建立CCX-CKR不同表达人乳腺癌细胞系BALB/c裸鼠原位移植瘤模型。建立CCX-CKR高表达人乳腺癌细胞系BALB/c裸鼠原位移植瘤模型后观察了各组移植瘤生长曲线，高表达组肿瘤生长明显受到抑制，具有统计学上的显著性差异。. 在后续的研究中，提取裸鼠腋窝淋巴结、腹股沟淋巴结、肺组织中蛋白,通过ELISA法检测比较了CCX-CKR不同表达组间转移靶器官中趋化因子mCCL19、mCCL21表达存在差异, CCX-CKR高表达组趋化因子mCCL19、mCCL21表达水平明显降低。通过细胞趋化实验Metrigel-transwell小室观察对照组和转染组中腋窝淋巴结、 肺组织蛋白提取物对人乳腺癌细胞MDA-MB-231HM趋化性差异,发现CCX-CKR高表达组其蛋白提取物对人乳腺癌细胞的趋化性明显弱于亲本细胞组及空质粒组。研究还发现亲本细胞组中肿瘤淋巴管与CCX-CKR高表达组肿瘤组织内的淋巴管相比具有明显的异质性。高表达组中淋巴管数目少于低表达组；高表达组中癌组织内的淋巴管管腔大且不规则，多呈扩张。微淋巴管浸润与癌组织中CCX-CKR的表达存在负相关。说明微淋巴管浸润可能是乳腺癌淋巴结转移有效的预测指标。. 未观察到CCX-CKR过表达对功能性受体CCR7表达及功能的影响。. 本研究为非典型趋化因子受体CCX-CKR作为乳腺癌多靶点治疗的潜在临床应用奠定坚实理论基础。