前列腺癌候选基因MSMB转录调控区变异及其功能机制研究

There is difficult for early diagnosis of prostate cancer(PC).NO efficient special biomarker for diagnosis of PC is used.Based on our previous study that a common variation on the regulation region of microseminoprotein beta, MSMB was significantly association with PC, we come up with a hypothesis that variations on the region impact on the expression of MSMB by changing the transcription activation of these elements . To answer our problem, at the first step the study plans to identify rare variations from a 19kb linkage disequillibrium region which covers the whole MSMB by straightly sequencing genomic DNA of 50 individuls with PC. And then we will confirm those variations that are significantly associated with PC using a large case-control study. Fowllowing, we will study the function mechanism of these variations by multiple molecular assays such as luciferase reporter assay,immunoprecipitaion-protein mass assay,EMSA and super EMSA assay and ChIP assay. Lastly,we intend to evaluate the role of these functional variations as potential molecular biomarkers in clinical application.through. Our study not only provides the supportive evidences for whether MSMB is a susceptible gene to PC, but provides possibilty for clinical operation.

前列腺癌（PC）早期诊断困难,然目前尚无特异性PC诊断生物标记物。本组在前期工作的基础上发现β微球精蛋白（MSMB）转录调控区存在PC关联的常见变异，提出这些变异可能影响了MSMB调控区的转录活性，从而改变了MSMB表达的工作假设。为此，本项申请拟首先对发现变异的MSMB基因组及其连锁区域进行全测序，并经大样本验证研究和比较鉴别等统计遗传分析，证实发现的PC关联变异。然后，通过荧光素酶报告基因、免疫共沉淀-蛋白质谱、EMSA、super-EMSA以及ChIP等多种分子生物学实验来证明关联变异的功能机理，最后经PC患者的肿瘤免疫组织化学检测验证，以及血清学的MSMB表达水平与PC的关系，展开研究这些变异的功能机制，并初步评价功能性变异作为潜在分子标记物的作用。研究结果可能为MSMB是否是PC的一个易感基因提供支持性证据，同时也可能为临床应用提供依据。

PC（prostate cancer, PC）是我国老年男性中常见的恶性肿瘤之一。人β-微球精蛋白基因（microseminoprotein beta, MSMB）定位于人类10号常染色体，其编码精浆蛋白(prostatic secretory protein, PRPS)。近来逐渐增多的研究证据显示MSMB在PC患者的PC组织中呈低表达，并且MSMB在PC组织中的表达程度与复发率成负相关1-2。然而，与癌旁组织比较，MSMB在PC中低表达的原因仍然不清楚。以此，我们提出假设：MSMB调控区变异可能影响了MSMB的转录。为了回答我们提出的假设，发现MSMB调控区上潜在的PC病因学变异，本项开展了以下两方面实验：1）在转录水平检测24 对PC及其癌旁组织中MSMB的表达，筛选出在癌组织中MSMB显著低表达的（≤3倍）样本对。2）利用下一代高通量测序技术筛查这些样本对MSMB基因及其上游80Kb的基因组连锁区域。3）分析影响MSMB差异表达的单核苷酸变异（single nuclear variants,SNVs)。结果：1）24对PC及其癌旁组织中，有19对显示MSMB在PC中的表达低于癌旁组织，其中9对呈显著性低表达。2）靶向测序结果共识别165个SNVs,其中69个为已经报道的常见SNVs，96个为新发现的SNVs。96个变异中27个位于MSMB的上游基因组序列， 68个位于intron序列，1个位于AL450342基因的编码区。96个新发现先的SNVs中，经生殖系传递的SNVs有37个，均为A/G的变异，变异频率在10%-60%；PC特异性的体细胞变异共42个，40个为A/G变异，2个位T/C变异。42个体细胞的变异频率在10%-30%。MSMB上游5Kb的序列中，频率为30%的体细胞变异有2个，频率为20%的体细胞变异有5个。这7个变异位点被78%（7/9)的PC肿瘤所携带。165个SNVs中共有11个变异位于CG位点上，它们均为生殖细胞变异。9对样品的测序结果中均未发现MSMB的3'UTR序列上有变异位点。结论：本研究在MSMB的转录调控区初步发现7个新的高频体细胞SNVs，它们可能参与PC组织中MSMB的转录调节。