同种异型DC刺激CD4+T细胞高效产生Foxp3+Treg的分子机制

Foxp3是调节性T细胞（Treg）发育、分化和发挥免疫抑制效应的重要转录因子。前期研究中我们发现小鼠同种异型DC可刺激CD4+T细胞高效产生Foxp3+Treg；而自身DC无此作用，并在人Treg的产生中也得到类似结果。这为获得足够数量Treg防治疾病提供了一种简便方法，但其机制尚不清楚。为了探讨其分子机制和信号通路，本课题拟利用前期建立的研究体系，从Foxp3表达调控的最新模式-Foxp3特异性增强子复合体入手，采用染色质免疫沉淀法等技术比较同种异型DC和自身DC刺激CD4+T细胞过程中调控Foxp3表达的相关转录因子，分析Foxp3特异性增强子复合体的组成或形成能力；并通过基因敲除或阻断实验确定同种异型DC上调Foxp3表达的主要信号通路和关键转录因子, 研究结果对揭示Foxp3的表达调控模式、制定调控Foxp3+Treg数量的策略、防治疾病具有重要的理论价值和潜在的应用价值。

研究背景：调节性T细胞（Treg）在维持免疫耐受、控制自身免疫性疾病、抑制移植排斥反应中发挥着重要作用。Foxp3是Treg发育、分化和发挥免疫抑制效应的重要转录因子。本研究的目的是探索调控Foxp3表达的模式，为调控Foxp3+Treg的数量、防治疾病奠定基础。.主要研究内容和完成情况：原计划主要包括两部分内容：一是 研究自身DC和同种异型DC刺激CD4+T细胞增殖体系对CD4+T细胞中Foxp3表达的不同影响；二是比较自身DC和同种异型DC刺激体系中调控Foxp3表达的转录因子和Foxp3特异性增强子复合体的差异，探索其调控机制。 第一部分内容已按计划完成，第二部分工作在试验中遇到了难以克服的困难,经过反复尝试很难达到预期结果，故对研究计划进行了调整，从寻找调控Foxp3的转录因子和特异性增强子复合体转向寻找调控Foxp3表达和Foxp+Treg的新基因或新策略。.主要研究结果：①发现在无外源性细胞因子的存在下，同种异型（DC）可有效刺激CD4+T细胞中Foxp3+Treg的产生，其活化的CD4+CD25+T细胞中80%以上表达Foxp3, 而自身（或同基因型）DC的作用很弱，其活化的CD4+ CD25+T细胞中Foxp3的表达不足10%；②发现新的抑癌基因PDCD4具有调控Foxp3+ CD4+Treg的作用，在高血脂环境下，PDCD4基因敲除小鼠脾脏Foxp3+CD4+ Treg细胞数量升高、动脉粥样硬化斑块局部Foxp3的转录水平也明显升高，且Foxp3的表达水平与动脉粥样硬化斑块的大小呈负相关关系；③发现PI3K抑制剂3-MA体内应用上调Foxp3及Fox3+Treg 相关细胞因子（IL-10、IL-35、TFG-beta）表达并抑制动脉粥样硬化斑块的形成和斑块的不稳定性；④发现用内质网化学伴侣分子PBA阻断内质网应激，可以上调小鼠体内Foxp3和Foxp3+Treg的水平及抑制动脉粥样硬化斑块的形成和斑块的不稳定性。 .研究的意义：发现同种异型DC、PI3K抑制剂3-MA、内质网伴侣分子PBA和PDCD4可调控Foxp3表达和FoxP3+Treg的数量并在小鼠高脂诱导的动脉粥样硬化化模型中证明3-MA、PBA和敲除PDCD4可明显降低动脉粥样硬化斑块的形成和斑块的不稳定性，为用3-MA、PBA和以PDCD4为靶点治疗动脉粥样硬化提供了实验数据。