间变性淋巴瘤激酶基因（Anaplastic Lymphoma Kinase,ALK)功能研究及其小分子抑制剂斑马鱼筛选模型的建立

间变性淋巴瘤激酶基因（Anaplastic Lymphoma Kinase, ALK）编码一种受体酪氨酸激酶（Receptor Tyrosine Kinase，RTK）。最近的研究发现它的染色体易位及点突变与多种肿瘤的发生相关，但是它的正常生理功能却仍然不清楚。本研究拟通过原位杂交、吗啉介导的反义抑制等手段研究ALK的斑马鱼同源基因Alk在神经系统发育过程中的作用。通过遗传相互作用和蛋白-蛋白直接相互作用研究Alk与其可能的内源配体Ptn、MdkineA和MidkineB之间的相互关系，从而深入揭示斑马鱼中内源Alk基因在正常胚胎发育过程中，尤其是神经系统发育过程中的生理功能。并通过建立转基因斑马鱼品系为针对ALK的小分子抑制剂筛选提供快速高效的动物模型。

间变性淋巴瘤激酶基因（Anaplastic Lymphoma Kinase, ALK）编码一种受体酪氨酸激酶（Receptor Tyrosine Kinase，RTK）。最近的研究发现它的染色体易位及点突变与多种肿瘤（例如：淋巴细胞瘤、神经母细胞瘤、肺癌等）的发生相关，但是它的正常生理功能却知之甚少。在本研究中，我们采用原位杂交技术鉴定了斑马鱼Alk基因的时空表达谱，结果显示从24hpf到48hpf在后脑中小部分神经细胞里表达，3dpf-5dpf表达扩大到中脑、间脑和后脑并在交感神经节中亦有表达。注射针对Alk翻译起始位点的吗啉修饰的反义RNA并未发现胚胎表型出现明显异常。通过对表达谱的研究推测Ptn很可能是其体内配体，还需要进一步的验证。. 另外，ALK基因是淋巴瘤、神经母细胞瘤、肺癌等多种肿瘤的重要药物靶点。因此本研究还发展出一种新的采用斑马鱼进行ALK小分子化合物抑制活性检测的筛选模型。通过组织特异性启动子sox10诱导人类癌基因NPM-ALK在斑马鱼银色素细胞系中进行表达可以产生过度增殖或异位表达的银色素细胞。采用潜在的ALK抑制剂TAE684孵育显示出剂量依赖性地抑制依赖于ALK的银色素细胞生成。我们注意到TAE684同时也会抑制ALK的高度同源基因Ltk的活性。Ltk是银色素细胞内源发育所必需的基因。但对于其他的酪氨酸激酶基因活性并无影响。而其他酪氨酸激酶抑制剂则并不影响银色素细胞的发育。我们的结果证实利用斑马鱼银色素细胞的自然反光可以开发出高通量自动筛选系统用于筛选和评估针对ALK或LTK抑制剂。