乙型肝炎病毒慢性感染加剧酒精性肝病以及天然杀伤 （NK）/NKT 细胞的免疫调节机制

Chronic HBV infection and alcohol abuse have become the main causes leading to the Chinese liver disease. However, whether chronic HBV infection could aggravate alcoholic liver disease (ALD) is still unclear. Our previous studies have found that chronic HBV infection could induce hepatic immune tolerance, such as IL-10 production, NK cell inactivation. Moreover, IL-10 and NK cell inactivation play important roles in the pathogenesis of ALD. We hypothesize that HBV play a critical role in aggravating the progression of ALD via NK/NKT cells-mediated immune tolerance and/or viral components-induced lipid metabolic abnormalities in hepatocyte. To test this hypothesis, HBV-ALD mouse model was created by feeding alcohol to HBV-carrier mice to compare the phenotype differences between wild type (WT) and HBV-carrier mice in alcohol consumption. Next, we plan to investigate the effects of NK/NKT cells on the progression of ALD in vitro and in vivo, and explore which viral component combined with alcohol in the induction of lipid metabolism abnormality by establishing a certain viral component deficiency HBV mouse model. Finally, the results from animal experiments will be verified in clinical study. This proposal may clarify the role of HBV in the progression of ALD and the regulatory roles of NK/NKT cells. This project also may provide some experimental evidence for developing potential molecules and immune cells as targets for treatment of ALD.

慢性HBV感染和酒精的大量饮用均是导致中国肝脏疾病的重要原因，慢性HBV感染是否加剧酒精性肝病（ALD）进展鲜有文献报道。前期发现慢性HBV感染诱导IL-10显著增加、NK细胞失活等免疫耐受状态，而IL-10和NK细胞失活在ALD发病中发挥重要的促进作用。我们推测HBV与酒精同时刺激肝脏时，HBV可通过NK/NKT细胞介导的免疫耐受途径、以及病毒成份诱导肝细胞脂质代谢异常的非免疫途径两条机制加剧ALD的发生发展。本课题拟应用酒精喂食HBV小鼠诱导HBV-ALD模型，比较正常和HBV小鼠在酒精刺激下的表型差异；体内外研究NK/NKT细胞在ALD进展中的免疫调节机制；建立病毒成份缺陷的HBV小鼠模型探究病毒何种成份联合酒精诱导脂质代谢异常；最后将该实验结果进行临床相关性验证。本课题将阐明HBV在加剧ALD进展中的作用以及NK/NKT细胞的免调节疫机制，为寻找潜在的靶点治疗ALD提供实验依据。

乙型肝炎病毒（HBV）感染和过度饮酒均是导致全球肝病的重要原因，但酒精性肝病的发生机制，以及是否影响HBV相关肝病进展尚不完全清楚。肝脏固有淋巴样细胞（ILCs）是一群具有多亚群异质性的细胞群体。肝脏含有较高频率的固有淋巴样细胞，近些年发现一群肝脏驻留的一型固有淋巴样细胞（ILC1s），与骨髓来源的常规NK细胞各占肝脏总ILC的一半。目前，肝脏ILCs亚群在ALD的发生发展中的作用机制，以及ALD对HBV感染有何影响均未见报道。. 过度饮酒使NK细胞大量凋亡，而肝脏ILC1s具有抗凋亡特性，从而破坏了二者在肝脏中原有的稳态分布，使肝脏ILC1s成为明显的优势亚群。通过转输 NK 细胞和腹腔注射NK细胞激活剂聚肌胞苷酸（poly I:C）来恢复 NK 细胞的数量可以减轻 ALD 的病情发展。同时，清除肝脏ILC1s的作用后，肝脏脂肪变性、肝损伤以及炎症应答均显著减轻。说明NK细胞在ALD中发挥了保护肝脏的作用，而肝脏ILC1s则促进了ALD的发展进程。进一步发现饮酒后肝脏ILC1s分泌IL-17a显著增多，且IL-17a可以加重肝细胞脂肪变。转输IFN-γ基因敲除小鼠的NK细胞抵消了NK细胞对肝脏的保护作用，使得IL-17a水平升高，提示肝脏ILC1s通过分泌IL-17a参与酒精肝的发展，而NK细胞来源的IFN-γ可以抑制肝脏ILC1s分泌IL-17a，发挥免疫保护功能。然而，随着酒精的长期涉入，IFN-γ+NK细胞显著减少，并伴随着IL-17a+ILC1明显增多，NK细胞逐渐失去了免疫保护能力，酒精脂肪性肝炎逐渐加重。同时，由于酒精导致IFN-γ+NK细胞减少，从而削弱了NK细胞抗病毒能力，诱导CD8+T细胞衰竭，延缓HBV的持续性感染时间。. 本研究从肝脏ILCs亚群及其相互作用的角度揭示了肝脏ILC1和NK细胞在酒精肝发生发展中的变化、作用和机制。因此，恢复肝脏ILC1s和 NK 细胞之间的平衡，或阻断IL-17a可能成为酒精性肝病的潜在治疗靶点。