基于细胞自噬与凋亡探讨二补助育汤对子宫内膜容受性蜕膜化进程的机制研究

Erbu Zhuyu Decoction is an empirical prescription for the treatment of low endometrial receptivity, which was utilized by the distinguished professor of Chinese medicine, Xiao Chengcong. The former clinical studies have indicated that it can alleviate symptoms, enhance the success rate of secondary IVF-ET. Experimental studies have demonstrated that the prescription participates in the process of embryo positioning, adhesion, angiogenesis, etc. via the targets such as pinocytosis, M-CSF, ανβ3, PI3K/Akt/eNOS signal path, so as to promote the endometrial receptivity, but little research has been carried out to explore its effect on the endometrial receptivity from the perspective of deciding process. Autophagy and apoptosis maintain endometrial cell homeostasis togetherly and play an important role in the process of endometrial decidualization. In order to further clarify the mechanism of Erbu Zhuyu Decoction, we plan to use Western blot, transmission electron microscope, flow cytometry, Immunofluorescence, etc. to discuss the effect of Erbu Zhuyu Decoction on autophagy and apoptosis in decidualization during embryo intrusion process, to further reveal the targets and effect mechanisms of “tonifying kidney-Qi, dredging uterus meridians” in boosting endometrial receptivity.

二补助育汤是名老中医肖承悰教授治疗子宫内膜容受性低的经验方，前期临床研究表明其能改善患者临床症状，提高再次IVF-ET成功率；实验研究表明该方药通过胞饮突、M-CSF、ανβ3、PI3K/Akt/eNOS通路等靶点参与胚胎的定位、黏附、母胎界面血管生成，从而提高子宫内膜容受性。但尚未从围植入期子宫内膜蜕膜化进程探究其对子宫内膜容受性的影响。细胞自噬和凋亡共同维持细胞稳态，在子宫内膜蜕膜化过程中发挥重要作用。为进一步阐明二补助育汤的作用机制，应用Western blot、透射电镜、流式细胞检测、免疫荧光等技术，探讨子宫内膜蜕膜化过程中该经验方对子宫内膜细胞自噬和凋亡机制的影响，进一步揭示“补肾气、通胞脉”立法之中药提高子宫内膜容受性的新作用靶点和效应机制。

二补助育汤是国医大师肖承悰教授治疗子宫内膜容受性低的经验方，前期临床研究表明其能改善患者临床症状，提高再次IVF-ET成功率；实验研究表明该方药通过多途径、多靶点参与胚胎的定位、黏附、母胎界面血管生成等过程，从而提高子宫内膜容受性。细胞自噬和凋亡共同维持细胞稳态，在子宫内膜蜕膜化过程中发挥重要作用。本课题研究以自噬和凋亡为研究聚焦点，逐层探讨两者在胚胎着床、尤其是蜕膜化过程中的作用，以及二补助育汤在此过程中对自噬和凋亡的影响。课题进行了以下研究：1）我们寻着前期研究思路，从CXCL12/CXCR4信号轴到自噬和凋亡，检测围着床期CXCL12、CXCR4、LC3、Beclin-1、bax、bcl-2等表达水平。结果显示，自噬和凋亡相关指标在围着床期降低，LC3在蜕膜化初期回升；二补助育汤能够增加胚胎着床障碍小鼠LC3表达，提示自噬和凋亡参与胚胎着床过程，二补助育汤能够调节子宫内膜自噬，维持细胞稳态。2）分离小鼠子宫内膜基质细胞，通过体外实验探索二补助育汤对蜕膜化基质细胞自噬和凋亡作用的影响。结果显示，蜕膜化基质细胞自噬指标LC3升高、p62降低，凋亡指标bax降低、bcl-2升高；使用自噬抑制剂和凋亡诱导剂后，蜕膜化基质细胞分别出现自噬水平降低和凋亡水平升高，二补助育汤能一定水平调节自噬和凋亡的表达。说明自噬和凋亡在蜕膜化进程中发挥重要作用，二补助育汤能够一定程度上调节细胞自噬和凋亡水平的异常表达。3）建立假孕小鼠模型、蜕膜化小鼠模型，通过体内实验探讨二补助育汤对蜕膜化进程中自噬和凋亡作用的影响。结果显示，蜕膜化小鼠模型子宫内膜水肿，间质细胞变大变圆，细胞间疏松。使用自噬抑制剂后，子宫外观上无明显肿大，自噬指标LC3降低。自噬抑制+二补助育汤组小鼠子宫外观上增粗肿大不均匀，LC3水平较自噬抑制组升高。此部分内容从体内实验证实，二补助育汤通过参与调解子宫内膜自噬，有助于内膜蜕膜化进程，进而改善子宫内膜容受性。我们研究探索中医药通过自噬与凋亡对内膜蜕膜化的调节作用，以为临床中医药治疗子宫内膜容受性低提供了治疗思路与方法。