Grb14在乳腺癌PI3K/Akt及MAPK信号通路调控中的作用研究

There are three members in Grb7 family,including Grb7,Grb10 and Grb14.Recent researches have demonstrated that Grb7 and Her-2 gene were co-amplified in human breast cancer cells, which makes Grb7 a new hot. As the new member of the Grb7 family,the function of Grb14 has not been fully demonstrated. According to the similar structural characteristics of Grb7 family, which has affinity to tyrosine kinase receptors,Grb14 may play a vital role in breast cancer development.Our early research had found that Grb14 is an independent prognostic factor of breast cancer patients.Grb14 may involve in the resistence of endocrine therapy and EMT progress by participating growth pathway and cytoskeleton regulating pathway.Our research will focus on the PI3K/Akt and MAPK signals, to illustrate the function of Grb14 in the development of breast cancer.It may provide a new molecular biomarker and a perspectives target therapies for breast cancer.

Grb7家族包括Grb7，Grb10和Grb14三个成员。Grb7由于与人乳腺癌Her2基因发生共扩增，成为近年来研究关注的对象。而Grb14作为Grb7家族成员之一，在乳腺癌中的作用目前缺乏深入研究。基于基因家族背景以及其天然对受体型酪氨酸激酶（RTKs）具有亲和力的结构特性，决定了Grb14在乳腺肿瘤的发生发展中可能的重要作用。我们的前期研究揭示Grb14对乳腺癌病人具有预后预测作用。Grb14很可能通过参与乳腺肿瘤的生长通路、细胞骨架调控信号通路，从而进一步参与乳腺癌内分泌治疗的耐药机制，以及上皮向间质转化促进肿瘤进展和转移的分子机制。因此，本课题将重点阐明Grb14如何通过调控PI3K/Akt及MAPK信号通路影响乳腺癌的发生发展；这对于发现新的分子标志物、进一步开拓对靶向治疗的探索具有积极和重要的意义。

GRB家族包括GRB7、GRB10、GRB14三个成员，其中GRB7由于与HER2基因共扩增，近年来成为人们关注的对象；而GRB14与GRB7序列相似，但在乳腺癌中的作用并不清楚。前期的研究显示，GRB4可以通过PIR/BPS结构域结合IR，或通过其SH2结构域结合FGFR、 RET、 Tek/Tie2等酪氨酸激酶受体，因此Grb14很有可能参与到肿瘤发生发展密切相关的通路中，但具体机制并不清楚。. 在本项目中，我们对GRB14在乳腺癌PI3K/AKT及MAPK通路信号通路调控中的作用进行了研究，包括：1、选择晚期的乳腺癌病人119例，检测GRB14的表达、ER、PR、HER2的表达及相互之间的关系。2、检测各乳腺癌细胞GRB14的表达情况，干预GRB14后乳腺癌细胞的增殖、凋亡、侵袭及细胞周期等肿瘤生物学特征的变化。3、探索GRB14 分子的下游信号通路，采用蛋白芯片的方法，检测T47D细胞在GRB14敲除后的下游信号通路改变。4、初步探索Grb14对内分泌治疗药物4-羟他莫昔芬的反应情况，及与上皮向间质转化（EMT） 的关系。研究结果发现GRB14是乳腺癌预后较好的一个生物标志物；然而在细胞水平，敲除GRB14后抑制细胞的增殖，引起细胞周期的阻滞，而不影响细胞凋亡；蛋白芯片的分析结果显示，敲除GRB14后PI3K/AKT通路信号减弱，ERK/MAPK通路变化不太，AMPK及胰岛素受体信号通路激活。此外GRB14可降低对他莫昔芬的敏感性，可能促进EMT的过程。. 本项目研究的科学意义在于两点，一是我们发现了GRB14是预测乳腺癌预后较好的生物标志物；二是通过细胞生物学功能和分子通路的分析，我们发现GRB14是促进细胞增殖和周期进程的一个因素，可能与雌激素的作用存在密切关系；分子通路的分析显示GRB14是主要通过影响PI3K/AKT通路起作用，与胰岛素受体通路及AMPK通路有关，并影响乳腺癌细胞对他莫昔芬的敏感性；这些结果系统地阐释了GRB14影响乳腺癌细胞发病的信号通路基础。