EGFR介导的RAS/MAPK和PI3K/Akt信号通路在小肠腺癌发病机制的作用及靶向治疗实验研究

小肠癌发生率低，人们对其发病机制认识较少。研究显示,EGFR介导的信号通路在多种消化道肿瘤的发生发展中起重要作用，以EGFR为靶点的治疗被认为是最有希望的结直肠癌治疗途径之一。本项目是在我们发现小肠腺癌中EGFR不突变而KRAS基因低突变的基础上，以EGFR介导的RAS/MAPK、PI3K信号通路为中心，通过体外细胞实验、移植瘤模型及人组织标本，采用EGFR配体阻断、靶向分子药物抑制、RNA干扰、基因过表达及RFPL/PCR、Real-time PCR等技术研究EGFR介导的RAS/MAPK和PI3K/Akt信号通路在小肠腺癌发病机制中的作用，探讨EGFR分子靶向治疗小肠腺癌的可行性及疗效，进而为小肠腺癌的发病机制研究及防治提供新思路和理论依据。

本项目通过EGF、EGFR 靶向药物处理小肠腺癌细胞，研究EGFR及RAS/MAPK、PI3K/Akt 信号通路关键成员在表达，明确EGFR及RAS/MAPK、PI3K/Akt 信号通路激活参与小肠腺癌的发病机制；通过应用RAN 干扰技术沉默EGFR 基因或过表达技术使EGFR 过表达，探讨EGFR 基因及相关信号通路在小肠腺癌发生中的重要作用。为此，本课题组成功构建EGFR 基因沉默慢病毒载体和过表达载体，转染小肠腺癌细胞HuTu-8 后，检测EGFR 相关RAS/MAPK、PI3K/Akt 通路关键成员EGFR、MAPK、p-MAPK、ERK、p-ERK、 Akt、p-Akt 蛋白及mRNA 表达。采用传统免疫组化和量子点标记免疫组织化学方法检测人正常小肠粘膜和小肠腺癌标本EGFR、MAPK、PI3K、Akt蛋白表达以及EGFR基因突变检测。动物实验部分在A3实验室进行，课题组采用Hutu-8细胞接种BAL/C裸鼠皮下，经多次接种，通过提高细胞活力和接种细胞数，观察裸鼠近3个月，均未成瘤，估计和细胞株致瘤能力弱有关，体内药物实验不得不暂停。体外实验和和人小肠腺癌标本检测结果表明，EGFR信号通路参与了小肠腺癌的发生机制，为EGFR靶向治疗药物治疗小肠腺癌提供了实验基础。.实验基本按原计划完成，本课题发表SCI论文2篇和国内核心期刊3篇，后续还会有1-2篇论文发表。