内蒙古蒙汉新生儿呼吸窘迫综合征与SP-B基因变异的相关性研究

Neonatal respiratory distress syndrome (respiratory distress syndrome of newborn, NRDS) is one of the common critical diseases in neonatal period . Recent studies have shown that NRDS is a multi-factor and polygenic disease. The susceptible and specific gene of NRDS is not entirely clear, gene expression of pulmonary surfactant B is the hot spot in pathogenesis of NRDS research abroad, however there are few domestic researches. So this project will use PCR gene analysis techniques to Screen SP-B gene polymorphisms in Mongolian and Han ethnic NRDS neonates in our region, Select highly relevant polymorphisms, build the SP-B mutant gene, analyze its downstream target genes in the H441 strain of alveolar type II cells by gene expression profile chip, detect the expression of surfactant B in lungs of transgenic mouse by using immunohistochemical technique and further study the impact of the SP-B mutant on lung development and possible molecular mechanism at the level of cellular and animal experiments, in order to seek the molecular genetic mechanism of NRDS and the new strategy of prevention for NRDS in our district.

新生儿呼吸窘迫综合症（respiratory distress syndrome of newborn， NRDS）是新生儿期较常见的危重症之一。近年研究显示NRDS是一种多因素多基因参与的疾病，导致NRDS易感的特殊基因还不完全清楚，在国外肺表面活性物质B（surfactant protein，SP-B）基因表达特点成为NRDS发病机制的研究热点，但国内研究甚少。因此本项目将采用PCR基因分析技术筛选我区蒙汉NRDS的SP-B基因多态性位点，并选定高度相关多态性位点，构建SP-B突变体基因，表达谱芯片分析其在肺泡II型细胞H441株中调控的下游基因，免疫组化技术检测SP-B蛋白在转基因小鼠肺部的表达，在细胞水平和动物实验水平进一步探讨SP-B突变体对肺脏发育的影响及可能的分子调控机制，以期探寻我区NRDS发病的分子遗传学机制和防治的新策略。

新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)是新生儿期最常见的危重症之一。研究显示NRDS是一种多因素多基因参与的疾病，导致NRDS易感基因有：SP-B、SP-C、ABCA3、MBL、TTF-1等，本课题依托于我区最大的三级甲等综合性大型医院---内蒙古医科大学附属医院，是全区危重产妇及新生儿急救中心，囊括600多例样本，时间跨度从2009年3月至2016年12月。本课题采用直接测序法分析SP-B、SP-C基因中的位点与内蒙古地区蒙汉族NRDS的相关性；通过mRNA测序寻找与蒙古族新生儿NRDS密切相关的基因；克隆SP-B基因1580位点C/T片段，并制备cDNA探针，采用组织芯片技术通过原位杂交检测肺泡II型细胞株H441中该基因mRNA的表达情况。研究结果有：内蒙古地区汉族NRDS患儿的SP-C外显子7未发现基因突变；SP-B 1580 C等位基因可能是内蒙古地区新生儿NRDS的易感基因之一；SP-B T131IC等位基因是内蒙古地区蒙古族新生儿NRDS的易感基因之一；SP-B R236C位点与内蒙古地区蒙汉族新生儿NRDS无明显相关；内蒙古地区蒙古族NRDS患儿的SP-C外显子4和5未发现基因突变，SP-C基因外显子4（T138N）、外显子5（S186N）位点基因多态性未发现与内蒙古地区蒙古族及汉族NRDS患儿有相关性；内蒙古地区NRDS患儿SP-C186位点基因多态性无明显的种族相关性；SP-C基因exon5区域c.715G>A位点杂合突变可能与早产儿RDS发生有关；通过mRNA测序，炎症反应在NRDS的形成过程中也发挥了重要作用；SP-B基因1580位点C/T基因型在肺泡II型细胞株H441中低表达或不表达，提示该基因型可能系NRDS发生的高危因素，加之本研究尚未发现突变基因，因此构建SP基因敲除小鼠模型的成功率并不高。本项目目前所得出的结论为我们以后的研究奠定了坚实基础，扩宽了思路，我们要进一步增加研究样本量，尤其是难治性NRDS的样本，并扩大SP-B及SP-C基因的研究范围，同时也研究ABCA3、MBL等基因，另外，在得出更多的相关性基因后，可构建更多的细胞株或转基因小鼠，在分子水平上深入探讨NRDS的分子调控机制，探寻内蒙古地区NRDS发病的遗传学机制。