miR-503和RNA结合蛋白CUGBP1相互作用影响肝癌转移的分子机制研究

RNA bind proteins (RBPs) include essential regulators of miRNA biogenesis, turnover and activiranty. RBPs-miRNA interactions are important for post-translational regulation in carcinogenesis and tumor metastasis.MiR-503 acts as a tumor suppressor in hepatocellualr carcinoma.However the molecular mechanism for this is still unclear. We found that ① mir-503 could inhibit RNA binding protein CUGBP1 expression in hepatocellular carcinoma (HCC) cells. ②CUGBP1 expression is significantly higher in HCC than in normal tissues and even higher in metastatic HCC tissue. CUGBP1 silencing could inhibit HCC cell invasion in vitro.③CUGBP1 interacts with AGO2 which is an element of miRNA induced silencing complex (miRISC), indicating that besides direct regulation on the target mRNA, CUGBP1 could also regulate miRNA activity. Therefore, we propose that: in HCC miR-503 suppresses CUGBP1 expression, thus inhibited CUGBP1's function to regulate target mRNA and miRNA activity. This might be an important pathway in HCC metastasis. This study could calrify the molecular mechanism of the posttranscriptional regulation by miR-503/CUGBP1 in HCC, providing a new insight for posttranscriptional regulation network in HCC metastasis.

RNA结合蛋白（RBPs）与miRNA的相互作用在肿瘤发生和转移侵袭中具有重要作用。mir-503在肝癌中起抑癌因子作用，其分子机制尚不清楚。我们发现① mir-503抑制RNA结合蛋白CUGBP1表达②CUGBP1在肝癌中表达升高，与TNM分期相关；体外促进肝癌侵袭。③CUGBP1 与miRISC组分AGO2相互作用，提示CUGBP1除了直接调控靶mRNA还可能参与调节miRNA的功能。因此mir-503抑制CUGBP1表达，从而抑制CUGBP1对靶基因mRNA和miRNA的功能调节，进而抑制肝癌侵袭转移，这可能是mir-503抑制肝癌转移的重要机制。本研究将阐明以上途径在转录后水平调控肝癌转移的分子机制，此课题将助于理解肝癌侵袭转移的分子基础，为miRNA的研究提供新思路，为丰富和完善肝癌转录后调控网络提供依据。

RNA结合蛋白（RBPs）与miRNA的相互作用在肿瘤发生和转移侵袭中具有重要作用。mir-503在肝癌中起抑癌因子作用，其分子机制尚不清楚。我们在前期研究的基础上进一步扩大样本量，对mir-503及其下游靶分子CUGBP1在肝癌转移中的作用进行了深入研究。我们发现：（1）在肝癌细胞中， mir-503抑制RNA结合蛋白CUGBP1表达。在临床标本中证实mir-503与CUGBP1在肝癌中的表达呈负相关，而CUGBP1在肝癌中表达升高，与TNM分期相关。利用不同转移潜能的肝癌细胞系进行体内外实验均证实，外源性CUGBP1过表达可促进肝癌细胞侵袭转移的能力，而CUGBP1基因沉默后肝癌细胞的侵袭转移能力下降。（2）在肝癌细胞中，integrin-α6可能是CUGBP1的下游基因之一。外源性CUGBP1过表达可使肝癌细胞中integrin-α6的蛋白及mRNA的表达水平，而CUGBP1基因沉默后，integrin-α6的表达水平显著下降。RNP-IP及pull-down assay证实CUGBP1在integrin-α6的3’UTR及CR均可直接结合，并增加integrin-α6 mRNA的稳定性。因此，我们的研究表明CUGBP1可能通过对下游基因integrin-α6的翻译后调控促进肝癌细胞的侵袭转移。（3）在肝癌细胞中，CUGBP1 与miRISC组分AGO2相互作用，RNP-IP的结果提示CUGBP1除了直接调控靶mRNA还可能直接调节若干转移相关miRNA的功能，具体芯片数据正在分析中。因此mir-503抑制CUGBP1表达，从而抑制CUGBP1对靶基因mRNA和miRNA的功能调节，进而抑制肝癌侵袭转移，这可能是mir-503抑制肝癌转移的重要机制。本研究将阐明以上途径在转录后水平调控肝癌转移的分子机制，此课题将助于理解肝癌侵袭转移的分子基础，为miRNA的研究提供新思路，为丰富和完善肝癌转录后调控网络提供依据。