肝癌细胞逃避内质网应激介导的凋亡的分子机制及丹皮酚的干预作用

内质网应激（ERS）介导的凋亡是新发现的凋亡通路，肿瘤细胞逃避该通路的机制尚不清楚。我们前期工作发现COX-2可能在肝癌细胞逃避该凋亡通路中起重要作用，当使用ERS诱导剂tunicamycin作用于肝癌细胞后，COX-2表达增多；当同时抑制COX-2后凋亡率显著上升，提示ERS 可上调COX-2表达而促进肝癌细胞存活，其机制尚不清楚。本研究将用siRNA下调PERK、ATF6和/或IRE1的表达，以确认ERS上调肝癌细胞COX-2表达是否依赖于UPR通路，并通过调控COX-2表达，观察其对凋亡的影响，以明确ERS时COX-2在肝癌细胞逃避凋亡中的作用；进而考察COX-2与PI3K/AKT通路的激活及IAPs等分子表达的关系，以期阐明肝癌细胞逃避ERS介导的凋亡的分子机制，为肝癌的治疗提供新靶点。在此基础上,研究丹皮酚对肝癌细胞逃避ERS介导的凋亡的干预作用，为其用于肝癌治疗提供实验依据。

内质网应激（ERS）介导的凋亡是新发现的凋亡通路，肿瘤细胞逃避该通路的机制尚不清楚，本研究选用人肝癌细胞株HepG2和人正常肝细胞株HL-7702作为实验对象，观察ERS诱导剂衣霉素（Tunicamycin，TM）对HepG2和HL-7702细胞的增殖抑制及细胞凋亡的影响,结果发现，人肝癌细胞株HepG2在TM诱导的ERS作用下细胞的增殖抑制作用并不明显，TM作用48h增殖抑制率仅达到24.6％，而人正常肝细胞株HL-7702在相同浓度TM的诱导下抑制率为63.9％。这一结果显示在发生ERS诱导的细胞凋亡时肝癌细胞对其相对耐受。在应用小剂量选择性COX-2抑制剂塞来昔布时，HepG2细胞对ERS诱导的细胞凋亡的敏感性提高，其增值抑制率上升至48.9%，于单用TM组相比具有显著差异性。而HL-7702细胞加用塞来昔布组于单用TM组相比抑制增殖效果没有明显差异，提示抑制COX-2可以提高肝癌细胞对内质网应激性凋亡途径的敏感性。我们使用Western-blot法观察COX-2选择性抑制剂塞来昔布和PI3K抑制剂LY294002对内质网应激诱导的HepG2肝癌细胞CHOP的表达的影响，结果表明，使用COX-2选择性抑制剂塞来昔布和PI3K抑制剂LY294002均可在抑制内质网应激诱导的p-AKT的同时，HepG2肝癌细胞的CHOP表达增多，提示抑制COX-2/PI3K/AKT通路继而调控CHOP的表达可提高肝癌细胞对内质网应激性介导的凋亡敏感性。有趣的是，使用丹皮酚时，丹皮酚也使HepG2细胞对ERS诱导的细胞凋亡的敏感性提高，用Western-blot法观察丹皮酚对内质网应激诱导的HepG2肝癌细胞COX-2，p-AKT，CHOP的表达的影响。结果表明，使用丹皮酚可抑制内质网应激诱导的HepG2肝癌细胞的COX-2的表达，同时，在丹皮酚抑制内质网应激诱导的COX-2的同时，HepG2肝癌细胞p-AKT的表达逐渐下降，并伴随HepG2肝癌细胞的CHOP表达增多，与COX-2选择性抑制剂塞来昔布和PI3K抑制剂LY294002作用内质网应激诱导的肝癌细胞CHOP的表达结果相似。提示丹皮酚可能通过COX-2/PI3K/AKT通路上调CHOP的表达提高肝癌细胞对内质网应激性介导的凋亡敏感性。