鸡传染性法氏囊病病毒诱导细胞凋亡分子机制的研究

传染性法氏囊病（IBD）是威胁世界养禽业、影响社会经济发展的高度接触性传染病。传染性法氏囊病病毒（IBDV）主要侵害雏鸡的中枢免疫器官法氏囊，诱导淋巴细胞凋亡产生免疫抑制，因此被称为鸡的"艾滋病"。IBDV的重要结构蛋白VP2既是优势抗原蛋白，又是诱导细胞凋亡的关键蛋白。Ras蛋白参与的信号转导通路与细胞凋亡密切相关。本研究利用免疫共沉淀技术进一步验证IBDV不同毒株VP2与酵母双杂交"捕获"系统初步筛选出的3个Ras蛋白（R-Ras、N-Ras和Rit-1）的结合能力；分段表达VP2，利用人工锌指核酸酶、RNA干扰和细胞凋亡定量检测等方法，研究结合Ras蛋白诱导细胞凋亡的VP2关键结构域或序列；检测caspase类型，研究VP2诱导细胞凋亡的介导途径。本研究旨在通过Ras蛋白信号转导途径解析IBDV VP2诱导细胞凋亡的分子机制，为进一步揭示IBDV的致病机理和新型疫苗设计奠定理论基础。

传染性法氏囊病病毒（IBDV）主要侵害雏鸡的中枢免疫器官法氏囊，诱导淋巴细胞凋亡产生免疫抑制，因此被称为鸡的“艾滋病”。IBDV的重要结构蛋白VP2既是优势抗原蛋白，又是诱导细胞凋亡的关键蛋白。Ras蛋白参与的信号转导通路中ERK1/2与细胞凋亡密切相关。本研究利用免疫共沉淀技术进一步验证了三株IBDV VP2蛋白与三个Ras蛋白（Rit-1、N-Ras和R-Ras）的结合能力，并通过分段表达VP2确定了结合Ras蛋白的VP2关键结构域。获得了高效抑制Rit-1、N-Ras或R-Ras的miRNA。通过三株IBDV VP2蛋白对DF1细胞ERK1/2磷酸化水平调节的研究，发现VP2蛋白抑制ERK2的表达，且与毒力呈正相关，初步确定VP2蛋白通过caspase-9途径诱导细胞凋亡。本研究通过Ras蛋白信号转导途径初步解析了IBDV VP2蛋白诱导细胞凋亡的分子机制，为进一步揭示IBDV的致病机理和新型疫苗设计奠定了理论基础。