AH神经元在缩宫素调节内脏敏感性中的作用及其机制

新近研究提示除了经典作用外，缩宫素很可能是内脏止痛因子，但作用机制不清。我们在预实验中首次发现缩宫素直接下调内脏感觉外周敏感性，诱导肠神经丛（ENS）感觉神经元AH神经元外向钾电流增加，二种作用均可以被缩宫素受体拮抗剂阻断。根据预实验结果我们推测：肠道内，缩宫素可能是通过作用于AH神经元，实现对内脏敏感性的调节。为验证该假设，我们用C57BL/6小鼠、缩宫素及缩宫素受体基因缺陷小鼠，采用膜片钳、肠系膜传入神经放电记录等电生理学方法结合分子生物学、免疫组织化学等多种方法,研究缩宫素对内脏敏感性的调节，明确ENS内AH神经元是缩宫素调节内脏感觉敏感性的靶点，并进一步研究缩宫素对AH神经元兴奋性的影响及其受体和受体后机制。本课题首次以AH神经元为研究对象探讨缩宫素对内脏感觉敏感性的调节，研究结果将拓展缩宫素的生理作用，并为缩宫素将来在临床上应用于缓解内脏痛提供有力的理论支持。

近年，研究发现缩宫素（oxytocin,OT)还是一种新的止痛因子，其再次成为研究热点。本课题研究了OT对大鼠肠系膜传入神经敏感性的影响及其机制，并深入研究OT对肌间神经丛AH神经元的作用，以期揭示OT的外周镇痛作用及其机制。研究发现：（1）OT剂量依赖性的下调大鼠空肠肠系膜传入神经化学和机械敏感性，抑制结直肠扩张诱导的大鼠内脏痛觉反应。OT受体阻断剂、选择性nNOS阻断剂均可以阻断OT下调肠系膜传入神经敏感性及内脏痛觉反应的作用。阻断肠神经系统和传入神经末梢之间的联系，可以部分阻断OT下调肠系膜传入神经敏感性的作用。OT预处理使纵行肌-肌间神经丛(longitudinal muscle myenteric plexus ，LMMP)标本一氧化氮（nitric oxide，NO）含量明显增加，NO阳性神经元细胞增加，OT受体阻断剂及选择性nNOS阻断剂均可以阻断此作用。NO供体硝普钠下调肠系膜传入神经末梢化学敏感性。证实：OT可能通过结合OT受体，激活nNOS增加NO生成，NO直接下调肠系膜传入神经的敏感性，引起大鼠对结直肠扩张的内脏痛觉反应下调。肠神经系统神经元可能是OT下调肠系膜传入神经敏感性的靶点之一。（2）OT剂量依赖性的诱导肠神经丛AH神经元膜电位超级化、激发AH神经元外向离子流增加。OT受体阻断剂以及钙依赖性大电导钾通道（large-conductance calcium-activated potassium，BKca）阻断剂预处理神经元可以阻断OT的作用。BKca通道α亚基与OT受体在神经元细胞共表达。OT预处理AH神经元细胞内钙离子浓度升高，肌浆网钙库清空剂和膜非特异性钙离子通道阻断剂抑制OT诱导的外向离子流增加。IP3受体阻断剂和PLC抑制剂均可部分逆转OT引起外向离子流增加。OT预处理LMMP，培养液中IP3含量增加，OT受体阻断剂阻断该作用。肠道有内源性OT生成，OT受体阻断剂增加内源性OT的生成。证实：OT作用于大鼠AH神经元上的OT受体，激活细胞中的OTR-PLC-IP3-Ca2+信号通路，开放细胞膜BKca通道，K+外流引起膜电位超极化。OT可能是肠神经系统中一种起负反馈调节作用的自分泌神经肽。.研究结果明确了生理条件下OT对内脏感觉初级传入的调节作用及机制，针对ENS神经元的研究为内脏感觉的外周调节机制提供了新思路。