干燥综合征中β-B2 crystallin对Treg细胞的调控作用和相关机制研究

Sjogren's syndrome (SS) is characterized by lymphocytic infiltration of lacrimal glands, salivary glands and other exocrine glands of autoimmune diseases, there is no cure means.Treg cells disorders is one of the key factor in the pathogenesis of SS, but the molecular regulatory mechanisms remain to be in-depth study. Crybb2 widely distribute in mammals, a variety of organs and tissues. Primary studies showed that the levels of Crybb2 was significantly reduced in Treg cells infiltrating in peripheral blood and glands of SS patients and associated with disease activity. Moreover,the crybb2 knockout mice induced the SS model to show the intensification of the disease, suggesting Crybb2 may play an important role in the regulation of Treg cells in SS, By means of chromatin immunoprecipitation, gene cloning and RNA interference ,this project plans to study: ① Crybb2 on the regulatory role of Treg cells in SS including related signaling pathway. ② research and verify the target points of Crybb2 acting on Treg③Using Crybb2-/-SS mouse model to study the regulation mechanism in vivo.The purpose is to clarify the regulation mechanism of Crybb2 on Treg cells in the SS , providing clue to more effective treatment and prevention of the SS strategy.

干燥综合征(SS)是一种以外分泌腺体淋巴细胞浸润为特征的自身免疫性疾病，治疗棘手，发病机理不明确。Treg细胞失调是SS发病的关键因素之一,但其分子调控机制尚待深入研究。β-B2晶体蛋白(Crybb2)是一种表达于多种组织的结构蛋白，新近研究提示其还具有晶状体外的生物学功能。前期研究发现，SS患者外周血和腺体浸润Treg细胞Crybb2表达显著降低且与疾病活动度相关；在Crybb2 基因敲除小鼠诱导的SS样病变病程加剧，提示Crybb2可能通过调控Treg细胞而参与 SS发病机制。本课题拟利用CHIP、基因克隆、RNA干扰等手段研究:① Crybb2对SS患者来源Treg细胞的调控作用及信号通路，②研究并验证Crybb2参与Treg调节的作用靶点，③利用Crybb2-/-SS小鼠模型研究其体内调控作用，旨在阐明Crybb2对Treg细胞的调控及在SS发病机制中的作用，为治疗SS提供新思路。

干燥综合征(SS)是一种以外分泌腺体淋巴细胞浸润为特征的自身免疫性疾病，治疗棘手，发病机理不明确。Treg细胞失调是SS发病的关键因素之一,但其分子调控机制尚待深入研究。β-B2晶体蛋白(Crybb2)是一种表达于多种组织的结构蛋白，新近研究提示其还具有晶状体外的生物学功能。前期研究提示Crybb2可能通过调控Treg细胞而参与 SS发病机制。本课题旨在阐明Crybb2对Treg细胞的调控及在SS发病机制中的作用，为治疗SS提供新思路。.分离SS患者和健康对照者外周血CD4+CD25+Treg细胞，定量检测Crybb2的mRNA表达水平，观察其与RF、球蛋白、抗-SSA,抗-SSB等与SS疾病相关的实验室特征之间的关系。结果发现SS患者外周血Tregs细胞中Crybb2 mRNA的表达水平显著降低；Crybb2的mRNA表达水平与RF及球蛋白相关。构建Crybb2过表达/ siRNA慢病毒载体，通过病毒转染入SS患者Treg细胞，在SS Treg细胞上实现Crybb2功能再现或阻断，研究Crybb2对SS患者Treg细胞生物学功能的影响。结果显示，Crybb2在 Treg细胞中的过表达可以增加细胞因子TGF-β的分泌，增强Treg细胞对Trep细胞增殖的抑制能力，减少IFN-γ、IL-2等细胞因子的分泌。提示Crybb2可能调控Treg细胞通过其效应因子TGF-β发挥作用。通过荧光素酶基因报告系统分析，提示Crybb2可以增强 FOXP3 的启动子活性，可能通过调节FOXP3的表达进而影响Treg细胞的功能。通过动物模型研究发现，与野生型比较，在Crybb2 KO小鼠中SS病程加速且腺体组织炎性浸润加剧。通过对Treg细胞中Foxp3相对表达量的检测，也进一步提示在体内实验中，Crybb2可能通过调节Foxp3的表达进而影响Treg细胞的功能。.本研究初步阐明了Crybb2通过调控Treg细胞在SS发病机制中发挥作用，为进一步深入理解SS的发病机理提供了思路和方向。