PSD-95介导Src家族PTK对NMDA受体NR2B亚基的磷酸化参与异动症的研究

长期应用左旋多巴会诱发异动症等棘手的临床问题。Src家族PTK对NMDA受体NR2B亚基的磷酸化与异动症的发生密切相关。蛋白激酶的精确定位是磷酸化特异底物进行快速、特异性信号转导的必要条件。PSD-95可能在Src家族PTK对NR2B的磷酸化过程中起关键作用。长期左旋多巴作用引起PSD表达量增加及一些蛋白质在PSD中的积聚，影响了PSD-95与蛋白质的相互作用，成为倍受关注的焦点。在此病理状况下，PSD-95对Src家族PTK催化NR2B磷酸化过程的影响尚不明确。本课题以此为切入点，应用小干扰RNA下调PSD-95表达，观察其对Src和Fyn活性影响，并研究促进还是抑制其对NR2B酪氨酸磷酸化，对PSD-95﹒Src或Fyn﹒NR2B三元复合物形成的影响，三者结合量的变化，进而为PSD-95介导Src家族PTK磷酸化NR2B参与异动症提供直接证据，为临床治疗提供潜在的治疗靶点。

NMDA受体NR2B亚基的酪氨酸磷酸化与异动症的发生密切相关。NMDA受体与其信号分子之间的作用异常参与了异动症的发生，PSD-95可能调控NMDA受体与其信号分子之间的作用。本研究应用小干扰RNA下调PSD-95表达，采用正反双向验证PSD-95在异动症的作用，应用行为学的整体评估、免疫沉淀技术对蛋白之间的作用进行效果评估。结果发现：左旋多巴刺激诱发异动症，纹状体部位（Src•PSD-95•NR2B）NMDA受体信号复合体的形成异常增强，进一步介导NR2B酪氨酸磷酸化正反馈上调NMDA受体功能。通过CP-101,606拮抗NR2B亚基抑制NMDA受体功能可反过来减弱（Src•PSD-95•NR2B）NMDA受体信号复合体的形成，并进而降低NR2B酪氨酸磷酸化下调NMDA受体功能。PSD-95小干扰RNA可明显改善异动症模型鼠的行为学，并抑制（Src•PSD-95•NR2B）NMDA受体信号复合体的形成。由此，我们的研究进一步揭示“（Src•PSD-95•NR2B）NMDA受体信号复合体→Src介导NR2B酪氨酸磷酸化→NMDA受体功能上调→（Src•PSD-95•NR2B）NMDA受体信号复合体”循环可能是Src介导NR2B酪氨酸磷酸化正反馈上调的分子基础。干预Src•PSD-95•NR2B蛋白之间的相互作用为临床治疗提供潜在的治疗靶点。